人类病毒研究论著

  • 银花青蒿栀子方抗A6型柯萨奇病毒的作用

    李菲;李娟;张振杰;侯林;崔清华;田景振;

    A6型柯萨奇病毒(Coxsackievirus A6,CV-A6)感染致手足口病发病率呈上升趋势,逐渐成为部分地区的主要流行株。但是,CV-A6的相关研究目前较少,亟需抗CV-A6药物的研究。中药在抗病毒方面具有独特优势,银花青蒿栀子方(Yinhua-Qinghao-Zhizi,YQZ)对多种病毒有效,但对CV-A6的作用尚未见研究报道,本研究应用细胞和动物感染模型评价了YQZ体内外抗CV-A6的作用。体外实验中,利用CV-A6感染RD细胞模型,以病毒抑制率和细胞上清病毒载量为指标评价YQZ的抗病毒作用,并采用Box–Behnken设计-响应面法优化YQZ的配伍比例。体内实验中,10日龄ICR乳鼠按窝随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组(利巴韦林10 mg/kg)、低剂量YQZ组(生药1.3g/kg)和高剂量YQZ组(生药2.6 g/kg)。采用滴度为107.4TCID50/mL的CV-A6 ip感染制备模型,统计生存率和临床评分;取骨骼肌、心脏、肺脏、脊髓、延髓等组织,HE染色观察病理变化;一步法RT-qPCR检测上述各组织的病毒载量。结果显示,YQZ抗CV-A6的最佳配伍为:金银花3 g、青蒿15 g、栀子2 g,其病毒抑制率和病毒载量拷贝数的对数均与模型预测值接近(P>0.05),且活性显著优于对照利巴韦林(P<0.01)。与模型组相比,低、高剂量YQZ组乳鼠生存率提高,急性弛缓性麻痹等症状明显缓解,骨骼肌、心脏、肺脏等脏器的病理损伤明显减轻,上述组织病毒载量均下降,其中高剂量YQZ组乳鼠骨骼肌、心脏和肺组织中的病毒载量显著降低(P<0.05)。以上结果表明,Box–Behnken设计-响应面法可促进YQZ的配伍优化筛选、提高药效,优化配伍比例的YQZ具有良好的体内外抗CV-A6作用。

    2021年05期 v.37 1027-1035页 [查看摘要][在线阅读][下载 1540K]
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  • 瓜蒌皮激活PI3K/PKB通路减轻柯萨奇病毒感染心肌细胞损伤的实验研究

    邱清勇;刘大勇;彭锦;吕秋;杜兰雪;

    柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)是引起病毒性心肌炎最常见的病毒株,感染心肌细胞后能够激活细胞凋亡、引起细胞损伤;已有研究证实,瓜萎皮激活磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B,PKB)通路减轻缺氧/复氧引起的心肌细胞凋亡,但瓜萎皮对CVB3感染引起心肌细胞凋亡的调节作用及机制尚不清楚。因此,本研究将观察瓜蒌皮激活PI3K/PKB通路减轻柯萨奇病毒感染心肌细胞损伤的作用。在培养心肌H9c2细胞后分组,对照组给予不含药物及病毒的培养基,CVB3组给予含有CVB3病毒液的培养基,瓜萎皮组含有CVB3病毒液及瓜萎皮提取物的培养基,瓜萎皮+抑制剂组含有CVB3病毒液、瓜萎皮提取物及抑制剂LY294002的培养基。检测培养基中乳酸脱氢酶(Lactic dehydrogenase,LDH)及磷酸肌酸激酶同工酶(Creatine phosphokinase-isoenzyme-MB,CK-MB)的含量、细胞活力A490、细胞凋亡率、细胞中cleaved caspase-9、cleaved caspase-3、p-PI3K、p-PKB的表达。结果显示,与对照组比较,CVB3组培养基中LDH、CK-MB的含量、细胞凋亡率、细胞中天冬氨酸蛋白水解酶-9(cleaved caspase-9,cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-9)、cleaved caspase-3的表达均增加,A490及细胞中p-PI3K、p-PKB的表达均降低(P<0.05);与CVB3组比较,瓜萎皮组培养基中LDH、CK-MB的含量、细胞凋亡率、细胞中cleaved caspase-9、cleaved caspase-3的表达均降低,A490及细胞中pPI3K、p-PKB的表达均增加(P<0.05);与瓜萎皮组比较,瓜萎皮+抑制剂组培养基中LDH、CK-MB的含量、细胞凋亡率、细胞中cleaved caspase-9、cleaved caspase-3的表达均增加,A490及细胞中p-PI3K、p-PKB的表达均降低(P<0.05)。以上结果表明,瓜萎皮提取物能够减轻CVB3感染心肌细胞的损伤及凋亡,激活PI3K/PKB通路是可能的分子机制。本研究首次发现瓜萎皮提取物对CVB3感染心肌细胞的损伤和凋亡具有抑制作用;同时,本研究还初步阐明了瓜萎皮提取物发挥心肌保护作用的分子机制、即激活PI3K/PKB通路。

    2021年05期 v.37 1036-1042页 [查看摘要][在线阅读][下载 1008K]
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  • 人乳头瘤病毒16型E7过表达细胞的鉴定及其迁移效应的影响

    谭晓淳;姜洁;林中民;谢自新;蒋朋飞;张丽芳;李文姝;

    鉴定人乳头瘤病毒16型早期蛋白7(HPV16E7)过表达细胞及其迁移效应的影响,为后续基于HPV16E7靶向分子作用机制的研究奠定工作基础。脂质体转染法将本室保存的pcDNA3.1-HPV16E7重组真核表达质粒分别转染人胚肾293T细胞(HPV16型DNA阴性)、宫颈癌SiHa细胞株(HPV16 DNA阳性),转染48 h后收集细胞,提取RNA,RT-PCR扩增相应的目的基因,Western Blotting和间接免疫荧光实验检测HPV16E7目的蛋白在细胞中的表达。转染24 h的细胞进行细胞划痕和Transwell实验,检测过表达细胞迁移行为的变化。RT-PCR结果显示:分别从E7质粒转染的293T、SiHa细胞的cDNA中,均可扩增到250 bp的目的条带;Western Blotting分析结果显示:以HPV16E7单克隆抗体为检测抗体,转染细胞的裂解液中均能在相对分子质量(Mr)约为15 000处出现特异性目的条带;间接免疫荧光结果显示:转染细胞中均能检测到目的绿色荧光,且分布于胞浆及细胞核周围;细胞划痕和Transwell实验结果显示:转染E7细胞的迁移效应显著提高。本研究证实了HPV16E7转染细胞后可成功表达,且过表达细胞明显促进了细胞迁移行为,为后续基于HPV16E7迁移相关分子机制及靶向干预等研究奠定了前期工作基础。

    2021年05期 v.37 1043-1050页 [查看摘要][在线阅读][下载 1164K]
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  • 中国东北地区人乳头瘤病毒16型全基因组克隆及HPV16.HaCaT重组细胞模型的构建及初步鉴定

    刘淼;吴盈盈;路一平;吴思;王爽;崔畅婉;于淼;孙峥嵘;

    为构建含东北地区人乳头瘤病毒16型(HPV16)全基因组的HPV16.HaCaT细胞模型,收集中国东北地区HPV16单一感染患者宫颈脱落细胞,提取DNA,将HPV16全基因组分成4个区段,通过4对特异性引物对HPV16全基因组进行分段扩增,测序后进行序列拼接及核酸序列分析,克隆HPV16全基因组序列;通过细胞转染,构建含HPV16全基因组的HPV16.HaCaT重组细胞模型;利用聚合酶链式反应(PCR)和细胞免疫荧光法检测重组细胞内HPV16早期基因的表达。成功克隆出中国东北地区HPV16全基因组序列(GenBank登录号:MW320358);构建了东北地区HPV16全基因组的重组质粒及HPV16.HaCaT重组细胞模型;证明了HPV16早期基因E1^E4、E5、E6和E7在重组细胞模型内均有表达,从而获得中国东北地区HPV16全基因组序列及含有HPV16全基因组的HPV16.HaCaT重组细胞模型。

    2021年05期 v.37 1051-1059页 [查看摘要][在线阅读][下载 1182K]
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  • PI3K抑制剂LY294002在HPV感染宫颈癌细胞的调节作用

    潘琴;王纯;杨燕峰;陶肖馨;蔡丽彬;方瑛;

    高危型人乳头瘤病毒(Human papiloma virus,HPV)感染是宫颈癌的危险因素,HPV16是常见的高危型HPV,与宫颈癌的发病有关,但具体机制未明确。有临床研究报道,宫颈癌组织中HPV16感染与磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)表达增加有关,为了阐明PI3K/AKT信号通路及其抑制剂LY294002在HPV感染宫颈癌细胞增殖中的调控作用,本实验培养了HPV16感染的宫颈癌细胞株SiHa、HPV阴性的宫颈癌细胞株C33A、正常宫颈上皮细胞株H8,检测了p-PI3K、p-AKT的表达水平;SiHa细胞分为对照组、50μmol/L及100μmol/L LY294002组,药物干预后检测细胞增殖活力A490值及p-PI3K、p-AKT、c-myc、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的表达水平;皮下注射SiHa细胞建立移植瘤小鼠模型,分为对照组、25mg/kg、50mg/kg LY294002组,药物干预后取移植瘤称重。结果显示,SiHa细胞中p-PI3K、p-AKT的表达水平均高于C33A、H8细胞;50μmol/L及100μmol/L LY294002组SiHa细胞的A490值及p-PI3K、p-AKT、c-myc、bcl-2的表达水平均低于对照组;25 mg/kg、50 mg/kg LY294002组移植瘤小鼠的移植瘤质量均低于对照组(P<0.05)。以上结果表明HPV16感染的宫颈癌细胞中PI3K/AKT信号通路过度激活具有促增殖作用。本实验阐明了PI3K/AKT通路及其抑制剂LY294002在HPV16感染的宫颈癌细胞增殖中的调控作用,PI3K/AKT通路的激活能够促进HPV16感染的宫颈癌细胞增殖及移植瘤的生长,使用信号通路抑制剂能够抑制细胞增殖及移植瘤生长,未来PI3K/AKT通路可能成为HPV16感染引起宫颈癌的防治靶点。

    2021年05期 v.37 1060-1065页 [查看摘要][在线阅读][下载 1015K]
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  • 福建省输入性D8基因型麻疹病毒分子流行病学特征

    李东;杨秀惠;张苏晗;陈致飞;张海荣;潘伟毅;周勇;

    为分析福建省输入性D8基因型麻疹病毒分子流行病学特征,采集咽拭子标本采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)筛查麻疹病毒核酸。用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增麻疹病毒核酸筛查阳性咽拭子及Vero/Slam细胞培养阳性产物,对麻疹病毒核蛋白(Nucleoprotein,N)羧基(COOH)端634个核苷酸(Nucleotides,nt)片段进行测序分析,构建系统进化树。最终分离获得1株麻疹病毒株,26条麻疹病毒N蛋白羧基末端450个nt序列。亲缘性分析发现,所有福建麻疹毒株与WHO D8基因型参考株(MVi/Manchester.GBR/30.94)在亲缘关系树上同属一个大分支,两者核苷酸序列和氨基酸(Amino acid,aa)序列同源性分别为96.4%~99.1%和96.7%~98.0%。其中2014年的福建毒株MVs/Fujian.CHN/28.14和MVs/Fujian.CHN/30.14与越南胡志明市2014年分离株MVs/HoChiMinh.VNM/11.14及美国纽约2013年分离株MVs/New_York.USA/19.13的nt同源性为100%;2019年的毒株MVs/Fujian.CHN/25.19与泰国龙仔厝府2018年分离株MVs/Samut_Sakhon.THA/8.18的nt同源性为100%;而剩余的23个监测毒株则与日本神户2019年分离株MVs/KobeC.JPN/28.19的核苷酸同源性和氨基酸同源性最高,分别为99.6%~100.0%和99.3%~100.0%。在病毒N蛋白羧基端150个氨基酸位点上,福建株与WHO D8参考株存在3~5个氨基酸位点差异。而与现用的疫苗株(Shanghai-191)相比,存在17~19个氨基酸变异位点,其中有14个氨基酸位点为所有福建株共有的变异位点,这些位点的变异总体上未对编码蛋白的氨基酸造成明显改变。结论是福建省成功分离获得1株D8基因型麻疹毒株。D8基因型为福建省发现的输入性麻疹基因型,病毒N蛋白羧基端氨基酸位点上与疫苗株相比均出现了差异位点。

    2021年05期 v.37 1066-1073页 [查看摘要][在线阅读][下载 1243K]
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  • 风疹病毒衣壳蛋白与宿主细胞相互作用蛋白的初步筛选及分析

    韩月雯;吴瑞;马超锋;李园园;

    风疹病毒(Rubella virus,RV)的衣壳蛋白(Capsid protein,CP)不仅是病毒颗粒的重要组成部分,而且还可以通过与宿主蛋白之间的相互作用来调控病毒的转录和复制。为了系统研究衣壳蛋白与宿主蛋白之间的相互作用关系,我们从RV基因组中克隆获得衣壳蛋白基因序列,将该序列导入含有eXact-6His串联亲和纯化标签的慢病毒表达载体中,并构建了稳定表达eXact-6His-Capsid融合蛋白的293T细胞系。通过eXact和6His标签的两次亲和纯化获得衣壳蛋白相互作用蛋白复合物,质谱检测并筛选后发现22个可能与衣壳蛋白相互作用的宿主蛋白。随后构建衣壳蛋白的相互作用网络并进行功能学分析,发现其相互作用蛋白主要参与病毒感染、RNA剪切、细胞凋亡及酶相关通路等过程。

    2021年05期 v.37 1074-1078页 [查看摘要][在线阅读][下载 1051K]
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  • 纤维顶球改造增强了人5型腺病毒载体对造血细胞的感染

    郭小娟;梅玲玲;付鸿臣;邹小辉;鲁茁壮;洪涛;

    基于人5型腺病毒(Human adenovirus type 5,HAdV-5)的腺病毒载体对造血细胞的基因转导效率低,将病毒fiber基因替换为HAdV-11p的同源基因F11p后,载体对造血细胞的感染效率增强。本研究拟在F11p纤维顶球(knob)结构域添加RGD4C多肽或HIV包膜糖蛋白(gp120)的V3结构域,观察重组HAdV-5对造血细胞感染效率的变化。在前期构建的pKAd5f11p153R-EPG腺病毒质粒基础上,结合限制性酶切和DNA组装技术,在F11p 153aa后(knob AB loop,153位)、228位(FG loop)以及300位(IJ loop)插入RGD4C肽或者gp120的V3肽,构建了共6种重组腺病毒载体(F153RGD-EG、F228RGD-EG、F300RGD-EG、F153CV-EG、F228CV-EG和F300CV-EG),以fiber未改造的HAdV5-EG和改造为F11p的F11p-EG病毒作对照,观察了其对4种造血细胞系U937、K562、Jurkat和HL60以及人原代T细胞的感染效率。结果显示,对于U937细胞,当感染复数(MOI,vp/cell)为100时,HAdV5-EG感染效率最低,为2%;其次为F228CV-EG,感染率为45%;F300RGD-EG、F153CV-EG和F300CV-EG感染率为85%~90%;F153RGD-EG、F228RGD-EG高于阳性对照病毒F11p-EG,三者分别为99%、99%、95%。各病毒对于Jurkat细胞的感染率均较高,但HAdV5-EG明显低于F11p-EG、F153RGD-EG和F228RGD-EG,当MOI为100时分别为75%、93%、93%和96%。感染K562细胞的情况与U937细胞类似。各病毒对于HL60细胞感染效率最低,MOI为500时,F300RGD-EG和F300CV-EG的转导效率为28%和33%,是F11p-EG的10倍。对于人原代T细胞,F153RGD-EG和F228RGD-EG优于F11p-EG,当MOI为1 000时,感染率分别为87%、90%和84%。研究结果表明,F11p knob插入RGD4C比单独F11p替换的HAdV-5对造血细胞的感染效率高,同时,本研究还发现HAdV-11p fiber knob的AB、FG或IJ loop可插入外源多肽,为腺病毒嗜向性改造增加了新靶点。

    2021年05期 v.37 1079-1088页 [查看摘要][在线阅读][下载 1461K]
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  • 关于miR-223在慢性乙型肝炎患者外周血中的表达及其生物学作用的研究

    徐文超;陈聪;

    观察CHB患者与健康人群外周血microRNA(miRNA)差异表达谱,寻找具有抗HBV能力的miRNA。用高通量测序对CHB患者(C组)和健康对照人群(N组)各3例外周血样本进行检测,筛选差异表达的miRNA后进行qRT-PCR验证,并在细胞模型中转染miRNA mimic后,ELISA实验观察对HBsAg和HBeAg水平的影响。测序结果共1028个基因,其中上调的基因有27个,下调的基因有20个,无明显差异的基因981个(log2FC<-0.585且P<0.05为标准),取FC改变最显著的5个miRNAs进行扩大样本量qRT-PCR验证,发现只有miR-223表达水平下降83%,与芯片结果保持一致。与未转染相比,在HepG2.2.15细胞中转染miR-223 mimic后,miR-223表达水平上升5.81倍,而HBsAg和HBeAg分泌分别下降了42%和34%,P<0.05;而转染阴性对照的miR-223表达水平及HBsAg和HBeAg分泌无明显改变,P>0.05。miR-223在CHB患者外周血中的表达显著下降,基于miR-223高表达的新型药物有可能对HBV有较好的抗病毒作用。

    2021年05期 v.37 1089-1095页 [查看摘要][在线阅读][下载 1034K]
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  • 急性胃肠炎暴发中GI.5[P4]型诺如病毒的遗传进化分析

    王璇;江晓;史小超;程婷婷;张韶华;丁洁;

    近年来,南京市急性胃肠炎暴发呈上升趋势,主要是由GII型诺如病毒(norovirus,NoV)引起,GI型较为少见。本研究通过对南京市输入性病例和本地性暴发急性胃肠炎疫情中GI.5[P4]型NoV进行遗传进化分析,为本地疫情控制和处置提供科学依据。对两起暴发疫情采集的18份样本进行荧光定量RT-PCR检测,并对NoV阳性样本部分聚合酶区和衣壳蛋白区进行一步法RT-PCR扩增、测序,结合参考株进行序列比对和进化树分析。18份样本中,GI型NoV阳性5份,其中4份扩增出条带,其N/S区域序列与2016-2018年已公布的GI.5[P4]同源性高达99.0%以上。其部分聚合酶区同1987年之后检出的GI.P4进化距离较近,变异不大。部分衣壳蛋白区在2003-2013年发生较为明显的进化,形成新的簇,期间在2008年又继续进化,慢慢趋于稳定。这是南京市首次在输入性病例和本地暴发疫情中均检出同源性极高的GI.5[P4],该NoV虽然在聚合酶区和衣壳蛋白区并没有发生较大进化,但是通过重组已在亚洲地区人群特别是中国多个城市导致了急性胃肠炎流行。因此,该型病毒株将是本市今后监测的重点。

    2021年05期 v.37 1096-1101页 [查看摘要][在线阅读][下载 1138K]
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  • 2010-2019年北京地区腹泻患儿中人腺病毒41型Fiber基因分子特征和进化分析

    刘立颖;钱渊;贾立平;董慧谨;朱汝南;

    人腺病毒41型(Human adenovirus 41,HAdV-41)是引起儿童腹泻的重要病原之一。为了解北京地区腹泻儿童中HAdV-41 Fiber基因的分子变异和遗传进化特征,选取2010-2019年首都儿科研究所附属儿童医院门诊腹泻患儿HAdV-41阳性的粪便标本,扩增Fiber全基因,使用多种生物信息学软件进行系统发生、遗传进化、种群演变和选择压力等分析。结果显示HAdV-41本地毒株存在1 644碱基(547氨基酸)和1 689碱基(562氨基酸)两种长度的Fiber基因,截短的15个氨基酸位于Fiber蛋白纤维轴区。Mann-Whitney U秩和检验提示检测到感染短Fiber基因的HAdV-41的患儿年龄更小(P=0.036)。同源性分析结果显示Fiber基因的核苷酸和氨基酸序列同源性均大于97%,主要分为四个进化分支(Ⅰ、II、Ⅲ和Ⅳ),其中Ⅰ和Ⅲ是主要的流行分支,分支Ⅰ主要在国内流行,而分支Ⅲ全球均有流行。HAdV-41共祖起源可追溯到1856年,平均进化速率每年为6.81×10-5碱基替换/位点,10年间理论有效种群一直比较平稳呈缓慢下降趋势。压力选择分析表明,一个正向和三个负向选择位点均位于Fiber蛋白的纤维轴区。上述结果表明2010-2019年间不同进化分支的HAdV-41在北京地区流行,进化速率稳定。Fiber蛋白轴区存在两种不同类型的氨基酸缺失。

    2021年05期 v.37 1102-1111页 [查看摘要][在线阅读][下载 1375K]
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  • 2018年河南省肠道病毒环境监测结果分析

    张明瑜;杨建辉;路环环;肖金波;张勇;张璐;路明霞;张延炀;

    通过对2018年河南省环境污水中肠道病毒(Enterovirus,EV)的持续监测,了解河南省环境污水中脊灰病毒(PV)和非脊灰肠道病毒(NPEV)的血清型分布及流行情况。选取了河南省东、西、南、北、中部的五个城市,对每个城市有10万~30万人共同使用的下水管网的地区进行污水采样,每两个月采集1次,每次采集两份污水样品,采集持续1年,对污水样品进行浓缩,将浓缩液接种至RD细胞、L20B细胞和HEp-2细胞进行病毒分离。对病毒分离物进行VP1区核苷酸序列测定分析,采用最大似然法构建系统进化树对EV进行分子定型,并进行核苷酸相似性分析。共采集污水样品60份,分离到EV阳性毒株16株(26.67%),分别为8株CVB5、3株E7、3株E11、1株CVB5+E11混合株;1株PVⅢ;环境监测标本与急性弛缓性麻痹(Acute flaccid paralysis,AFP)病例标本,在济源市和周口市分离到的CVB5比例有一致性,郑州市和济源市分离到的E7比例有一致性;污水标本中阳性毒株的检出时间要早于AFP病例标本中同种毒株型别的检出时间1~3个月。来源于AFP病例监测和环境监测的CVB5之间的核苷酸相似性为94.7%~99.6%,来源于AFP病例监测和环境监测的E7之间的核苷酸相似性为92.5%~100.0%。来源于AFP病例监测和环境监测的CVB5属于同一个基因型,E7也是同一个基因型,甚至是同一个病毒传播链。河南省2018年建立了环境监测方法,是AFP病例监测的有益的补充,也可对人类肠道病毒病流行或暴发进行预测和预警。

    2021年05期 v.37 1112-1118页 [查看摘要][在线阅读][下载 1010K]
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动物病毒研究论著

  • 鉴别检测非洲猪瘟野毒株和基因缺失疫苗株的三重荧光PCR的建立

    林彦星;史卫军;曹琛福;黄超华;曾少灵;吴江;徐鹏;花群义;

    非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(African swine fever,ASFV)引起的猪的一种急性、高度接触性传染病。本研究根据ASFV B646L、MGF360-14L和CD2v基因设计了3套引物和探针,建立了可同时鉴别检测ASFV野毒株和基因缺失疫苗株的三重荧光PCR方法。结果表明,该法特异性强,可同时检测ASFV B646L、MGF360-14L和CD2v基因,与猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、猪A型塞内卡病毒等无交叉反应;两份ASFV MGF360-505R与CD2v基因联合缺失疫苗株DNA三重荧光PCR法检测结果都仅出现一条B646L扩增曲线,与预期一致;灵敏度高,该法对重组质粒pUC-B646L、pUC-360-14L和pUC-CD2v的检出限分别为1.572×10~3拷贝/mL、1.934×10~3拷贝/mL和1.929×10~3拷贝/mL,灵敏度比世界动物卫生组织(World organization for animal health,OIE)推荐的荧光PCR高10倍;重复性好,对三种重组质粒检测的Ct值批内和批间变异系数均小于2%;应用该法及OIE推荐的荧光PCR对1 215份样品进行平行检测,结果显示23份样品为阳性,1 192份样品为阴性,两种方法检测结果一致。本研究建立的方法能鉴别检测ASFV野毒株和基因缺失疫苗株(缺失MGF360-505R和/或CD2v基因),对将来基因缺失疫苗的推广应用及ASF疫情防控具有重要的意义。

    2021年05期 v.37 1119-1127页 [查看摘要][在线阅读][下载 1332K]
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  • 表达荧光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因重组非洲猪瘟病毒的构建

    康力;周仕君;宋洁;李江南;翁长江;

    非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染家猪和野猪引起的一种高致病性传染病,家猪感染ASFV强毒株后死亡率接近100%。为了研究ASFV的致病机制,利用绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告基因构建重组病毒已经广泛应用,但易于定量检测且适用于高通量筛选的重组ASFV目前没有报道。本研究以ASFV HLJ/18分离株为亲本病毒,采用CRISPR/Cas9基因编辑技术和同源重组技术将表达Gaussia荧光素酶(Gluc)和EGFP的报告基因表达盒插入到ASFV的K145R基因的位置,构建可以同时表达Gluc和EGFP的重组ASFV(rASFV-Gluc-EGFP)。通过PCR鉴定、Gluc和EGFP表达的检测,确定获得的重组ASFV能够感染猪肺泡巨噬细胞且表达Gluc和EGFP。对构建的重组病毒和亲本病毒进行生长曲线比较,结果表明插入的报告基因不影响病毒在猪肺泡巨噬细胞中的复制。F5、F10和F15代重组病毒基因鉴定和报告基因表达检测结果表明,重组病毒能稳定表达插入的双报告基因。本研究成功构建了表达Gluc和EGFP的重组ASFV,可以针对报告基因进行定量检测和高通量筛选,为ASFV的感染和致病机制研究奠定坚实的基础。

    2021年05期 v.37 1128-1134页 [查看摘要][在线阅读][下载 1122K]
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  • 小反刍兽疫病毒Nigeria75/1疫苗毒及其N蛋白对山羊PBMCs免疫效应的影响

    周岩岩;吴锦艳;李玲霞;刘丹;周建华;曹小安;刘永生;刘湘涛;尚佑军;

    小反刍兽疫(PPR)是羊、骆驼等小反刍动物的一种急性、烈性、接触性A类传染病,发病率和致死率极高。目前,PPR在全球仍呈现区域性流行和多地散发势态。为探讨PPRV及N蛋白体外诱导山羊外周血单个核细胞(PBMCs)在不同时间对PBMCs免疫应答效应的影响。本研究将PPRV Nigeria75/1疫苗毒(1 MOI)、重组N蛋白(10μg/mL)和RPMI 1640(阴性对照)体外刺激PBMCs 48h、72h、96 h。采用CCK-8法检测PBMCs细胞增殖情况;qRT-PCR及ELISA检测炎症因子包括IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ的mRNA表达水平及分泌情况;流式细胞术检测T细胞CD4+和CD8+的表达、及单核来源树突状细胞(DCs)表面分子CD40、CD86、CD80的表达、以及检测PPRV感染PBMCs引起的细胞凋亡。研究发现:与对照组相比,PPRV能够抑制PBMCs的体外增殖,显著促进炎症因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ的表达(P<0.05)。并且PPRV感染PBMCs产生细胞凋亡,促进CD4+T细胞和CD8+T细胞表达。另外PPRV体外刺激DCs,CD40、CD86、CD80的表达显著升高(P<0.05),提示PPRV具有刺激DCs细胞成熟与分化的功能。进一步研究发现PPRV N蛋白体外刺激PBMCs能引起与PPRV作用相同的免疫效应。本研究表明PPRV Nigeria75/1疫苗毒体外感染PBMCs主要引起炎症反应与细胞凋亡、促进单核来源DCs成熟与分化,并且N蛋白参与PPRV引起的各项免疫功能。

    2021年05期 v.37 1135-1147页 [查看摘要][在线阅读][下载 2472K]
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  • 内蒙古部分地区骆驼和羊寄生蜱虫病毒组学分析

    蔡玉荣;燕超;孔云逸;张刚;刘东晓;李勇;

    为了解内蒙古地区蜱虫病毒组学的本底数据,采用病毒宏基因组学方法对在内蒙古阿拉善盟左旗、右旗和四子王旗地区3个采样点采集骆驼和羊体表寄生的1 789只蜱虫样品进行病毒宏基因组学分析,并对特定病毒进行巢式PCR扩增和测序,通过Clustal W和MEGA7.0等生物信息学软件对获得的病毒基因序列进行遗传进化分析。数据显示,蜱虫样品携带包括植物、脊椎动物和非脊椎动物等来源的17个病毒科和一些未分类的病毒;其中,2株弹状病毒具有丰富的遗传多样性,与新疆地区和长江地区的弹状病毒的同源性达到98.5%和96.26%,提示蜱虫弹状病毒可能是通过羊和骆驼等动物贸易导致了新疆和内蒙古地区,以及内地的跨区域传播;细小病毒仅在羊来源的蜱虫中检测到,与中国河北地区的山羊血清中的细小病毒形成同一进化分支,我们推测蜱虫细小病毒在国内不同地区间可跨区域传播,在进化分析过程中,发现这种病毒与多种的细小病毒的同源性都不低于50%,提示细小病毒可能具有遗传稳定性;Tamdy病毒与来自阿塞拜疆、乌兹别克斯坦和美国的Tamdy病毒均具有极高的同源性,结果显示该病毒在内蒙古地区已经出现,并存在潜在流行的可能,有必要对Tamdy病毒进行进一步的监测;在本研究中,我们鉴定的白蛉病毒与来自新疆的亚洲璃眼蜱所携带的博乐蜱虱病毒形成同一个进化分支,与新型布尼亚病毒和Heartland virus病毒的同源性达到50%以上,该结果提示,我们发现的蜱虫白蛉病毒可能具有潜在的致病性,需要对其流行情况和致病性进行监测和研究。本研究为完善内蒙古部分地区蜱虫病毒的多样性和本底情况提供了重要的基础数据。

    2021年05期 v.37 1148-1157页 [查看摘要][在线阅读][下载 1316K]
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  • 十二种血清型蓝舌病病毒型特异性实时荧光定量RT-PCR定型方法的建立

    李占鸿;杨振兴;宋子昂;李华春;李卓然;廖德芳;杨恒;

    为建立蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)十二种血清型(血清6、8、10、11、13、14、17、18、19、20、22与23型)特异性实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法,根据GenBank公布的十二种BTV血清型毒株的基因节段2序列,选择高度保守区域,设计每种BTV血清型的扩增引物与TaqMan探针;以十二种血清型BTV参考毒株的cDNA为模板,进行引物的筛选,建立BTV血清型特异性qRT-PCR检测方法;对检测方法的灵敏度、特异性与重复性进行验证,分别以含有50、100与200个BTV噬斑形成单位(Plaque forming unit,PFU)的模拟BTV阳性血液样本为检测对象,进行检测效果的评估。实验结果表明,建立的BTV血清型特异性qRT-PCR检测方法具有良好的灵敏度和特异性,对不同血清型BTV核酸拷贝数的检出下限在12拷贝/μL(BTV-8)至57拷贝/μL(BTV-14)之间;对我国反刍动物上广泛流行的流行性出血病病毒、中山病病毒与阿卡斑病毒核酸的检测结果均为阴性。反应具有良好的重复性,组内Ct值的变异系数在0.92%至1.96%之间,组间Ct值的变异系数在0.26%至1.62%之间。对模拟BTV阳性血液样本的检测结果显示,BTV血清型特异性qRT-PCR可有效检测含50个PFU(噬斑形成单位)的BTV血液样本。本研究建立的十二种BTV血清型特异性qRT-PCR定型方法具有特异性强、灵敏度高和耗时少等优点,可用于动物感染BTV血清型的诊断。

    2021年05期 v.37 1158-1166页 [查看摘要][在线阅读][下载 947K]
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  • 细胞源与鸡胚源传染性支气管炎病毒激活JAK-STAT信号通路的差异性研究

    楚红燕;宫晓倩;翁文莲;王欢;方守国;丁铲;廖瑛;陈丽颖;

    鸡传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus,IBV)对鸡的呼吸道、肾脏和输卵管等器官造成严重损伤,主要引起鸡产蛋率下降和雏鸡死亡。目前通过鸡胚传代获得IBV疫苗株和流行毒株。IBV Beaudette株是目前实验室研究的经典毒株,已经适应人源和猴源细胞,可利用Vero细胞进行制备。有研究表明,IBV感染延迟干扰素的表达,并对JAK-STAT信号通路具有拮抗作用。本研究中发现,通过Vero细胞制备的IBV Beaudette株,在感染早期激活STAT1,通过鸡胚制备的IBV Beaudette,则不能有效激活STAT1。进一步研究发现,鸡胚传代的IBV QX株和新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)亦不能有效刺激JAK-STAT信号通路。两种制备病毒的方式分别得到不同的试验结果,推测是由于在病毒感染条件下,Vero细胞分泌到培养液中的细胞因子所致。进一步研究揭示,病毒感染条件下,细胞分泌的因子,瞬时激活了STAT1。本研究对于病毒的制备方式对天然免疫信号通路的影响,具有一定的参考和借鉴作用。

    2021年05期 v.37 1167-1174页 [查看摘要][在线阅读][下载 1188K]
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专题报道

  • 重要呼吸道传染病智慧化监测预警与有效应对策略探讨

    王金龙;陈涛;任翔;张巍巍;韩雅俊;王大燕;王世文;何广学;舒跃龙;

    全球新发突发传染病不断出现,特别是新型冠状病毒肺炎疫情暴发,对人类健康和社会发展造成巨大影响。本文通过不同渠道收集有关资料,试图梳理我国呼吸道传染病监测预警发展和现状,探讨采用大数据、区块链、人工智能等高新技术,建立智慧化新发突发呼吸道传染病监测预警平台。运用统一关键数据标准、口径,打通部门之间数据壁垒,建立数据共享机制,实时自动采集与传染病有关的数据信息。利用大数据、人工智能、云计算等技术,建立相关数据模型,强化数据分析应用,达到早期识别和预警,做到遏止突发事件的发生发展和传播。同时,在疫情防控过程中能够实时获得疫情的发生发展趋势,及时提出科学精准的有效防控策略。不断提升我国应对突发公共卫生事件的能力和水平,保障我国生物安全。

    2021年05期 v.37 1175-1178页 [查看摘要][在线阅读][下载 864K]
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综述

  • 人乳头瘤病毒疫苗对宫颈以外部位肿瘤的保护效果研究

    黄泽宏;姚星妹;黄守杰;吴婷;

    人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染可导致肛门-生殖器及口咽等多部位肿瘤。近年来,随着对HPV研究的深入及多种HPV疫苗陆续上市,HPV疫苗对于多部位肿瘤的保护效果受到越来越多的关注。已有大量研究证明HPV疫苗能够有效预防宫颈癌的发生,而近年也逐渐积累了一些HPV疫苗预防宫颈以外部位肿瘤的证据。本文拟综述HPV疫苗对于头颈、肛门、外阴与阴道、阴茎部位肿瘤保护效果的研究进展。

    2021年05期 v.37 1179-1186页 [查看摘要][在线阅读][下载 898K]
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  • 流感病毒抑制剂的研究进展

    邵亮;俞飞;

    流感病毒(Influenza Virus,IVs)属于正黏病毒科(Orthomyxoviridae),单股负链RNA包膜病毒,由于其传播和变异速度快,且致病力和致死率高,严重威胁人类的健康和生命。理论上,抑制流感病毒生命周期的任何一个阶段,都可以有效地抑制病毒的复制和传播。目前FDA已批准的药物主要作用于子代病毒的释放阶段,随着流感病毒耐药问题的日益严重,不同作用机制的抑制剂不断被发现,部分已经进入临床研究阶段。新技术、新思路持续推进着流感病毒抑制剂的研究,本文将对最新的流感病毒抑制剂研究进展进行综述,旨在为新型的流感病毒抑制剂的设计和研发提供参考和思路。

    2021年05期 v.37 1187-1196页 [查看摘要][在线阅读][下载 1481K]
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  • HPV16型基因变异与宫颈癌发生相关性的研究进展

    王莹莹;李传印;姚宇峰;

    宫颈癌是女性常见肿瘤之一,严重影响女性健康。研究发现,高危型人乳头瘤病毒感染是宫颈癌发生的重要因素之一。HPV16型是最为常见的一种高危型人乳头瘤病毒,其基因组变异可能具有更大的致癌潜能。本文主要针对HPV16基因型各个区域常见的突变位点与宫颈癌的关系做一总结叙述。

    2021年05期 v.37 1197-1207页 [查看摘要][在线阅读][下载 938K]
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  • 乙型肝炎病毒核心抗原作为免疫载体的研究进展

    张海霞;李生军;冯若飞;

    乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc)基因序列的C端、N端以及MIR区在插入外源基因后,能够正确折叠和组装成病毒样颗粒(VLPs),并且将外源序列暴露到衣壳的刺突,诱发强烈的外源序列特异的体液和细胞免疫反应。因此,HBc可作为基因工程疫苗的载体,在病毒性传染病的预防和肿瘤疫苗的开发和研制中都有广阔的前景。本文将从HBc作为免疫载体所具备的优势及其在病毒性传染病和肿瘤疫苗的应用进行综述。

    2021年05期 v.37 1208-1214页 [查看摘要][在线阅读][下载 897K]
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  • 诺如病毒和肠道菌群的互作关系及机制研究进展

    梁耀民;陆胤波;曹颖雯;罗奕熔;蒋月婷;寇晓霞;

    诺如病毒(Norovirus,NoV)是全球流行性、非细菌性胃肠炎暴发的主要原因之一。研究表明,肠道菌群能与诺如病毒互作并调控其在肠道中的感染和复制过程,但关于两者之间的互作关系及机制研究目前还处于初步探索阶段。本文通过综述国内外最新研究,系统全面地阐述了肠道菌群通过稳定病毒结构、增强病毒与靶细胞的结合,调节宿主先天免疫应答等多种途径促进诺如病毒感染的作用和可能机制,对于更进一步了解和研究诺如病毒感染和发病机制提供新思路和视角。

    2021年05期 v.37 1215-1220页 [查看摘要][在线阅读][下载 884K]
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  • 拮抗人和动物病毒的细菌及其作用机制研究进展

    王文迪;马红霞;高云航;么乃全;徐凤宇;

    目前病毒性疾病对人类、动物健康的危害以及对国民经济各领域的影响,突出了研发有效、安全防控病毒性疾病新产品的重要意义。某些细菌如益生乳酸菌和芽胞杆菌、放线菌等具有良好的抗病毒作用,可作为病毒性疾病防控新产品研制基料。本文综述了细菌抗人和动物病毒作用及机制方面的国内外研究现状,以期为细菌尤其是益生菌在病毒性疾病防控上的应用提供科学参考。

    2021年05期 v.37 1221-1226页 [查看摘要][在线阅读][下载 907K]
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  • 宿主细胞膜骨架蛋白在病毒感染复制中作用的研究进展

    苏珊;刘鑫;康巧珍;郑永唐;

    病毒与宿主细胞之间相互关系的研究不仅具有重要的理论意义,也是重大的医学实践课题。病毒可以与宿主蛋白相互作用并改变细胞的正常功能,从而促进病毒的感染与复制。宿主细胞膜骨架蛋白在病毒的生命周期中起着重要作用,研究表明细胞膜骨架蛋白参与了病毒的感染及复制,尽管许多精细机制尚不清楚,但这扩展了人们对细胞膜骨架蛋白功能的理解。本文重点介绍宿主细胞膜骨架蛋白如肌动蛋白、血影蛋白在病毒进入、细胞内运输、组装和释放等病毒感染复制过程中的作用。

    2021年05期 v.37 1227-1233页 [查看摘要][在线阅读][下载 946K]
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  • TLR4信号通路介导病毒性急性肺损伤与ARDS的研究进展

    张雨茜;王荣花;陈祥;严彦;张评浒;

    Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)是参与非特异性免疫的Ⅰ型跨膜蛋白分子,可识别病原相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns,PAMP)并在病原体侵入体内的早期阶段激活机体的免疫应答,在响应宿主细胞对微生物病原体的识别中起重要作用,是机体抵抗感染疾病的重要屏障。以流感病毒和冠状病毒为代表的呼吸道病毒感染在临床具有极高的发病率和死亡率。此类病毒感染细胞后可通过模式识别受体和病原体相关分子模式相互作用激活宿主的先天免疫系统,诱发宿主产生过激的炎症反应从而引发"细胞因子风暴",最终导致急性肺损伤与急性呼吸窘迫综合症而致人死亡。因此,本文就Toll样受体家族中的Toll样受体4介导的信号通路为对象,就其介导的信号通路在流感病毒与冠状病毒复制及其在导致病毒性急性肺损伤与ARDS形成中的作用及靶向抑制该通路治疗病毒性肺炎的研究进展作一综述,以供同行参考。

    2021年05期 v.37 1234-1243页 [查看摘要][在线阅读][下载 1000K]
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  • 非洲猪瘟病毒跨膜蛋白CD2v的结构与功能研究进展

    何庆;邹亚文;王东亮;秦艺文;刘翔燕;王乃东;

    非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染家猪和野猪,引起的高度传染性和致死性动物传染病,不同品种和年龄阶段的猪均易感,发病率和死亡率可高达100%。ASFV是全球生猪产业的重点疫病之一,目前无商品化疫苗。ASFV是一种大而复杂的双链DNA双层囊膜病毒。ASFV主要跨膜蛋白CD2v是介导血细胞吸附(Hemadsorption,HAD)和鉴定病毒血清型的关键蛋白,它参与ASFV宿主免疫应答、免疫逃逸和病毒复制等生理生化过程,且是ASFV疫苗和抗病毒分子研发的潜在重要靶点。探究CD2v在ASFV感染中的作用及机制渐成热点。因此,本文对ASFV CD2v的结构及其生物学功能研究报道进行分析综述,将为阐明ASFV致病机理和疫苗研发等提供重要参考。

    2021年05期 v.37 1244-1251页 [查看摘要][在线阅读][下载 929K]
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  • 鼩鼱科动物携带汉坦病毒科病毒的研究进展

    王詝;李博琦;李永久;杨巧江;田新民;李娜;张隽晟;刘铸;

    鉴于近年来全球性动物传染源的疫情不断发生,病原溯源研究成为人类关注的焦点之一。鼩鼱科动物具有十分广泛的地理分布范围,且与人类生活存在密切联系,其携带病毒应该得到更多的关注。本文就鼩鼱科动物种类及其分布、鼩鼱科动物携带汉坦病毒研究及其在汉坦病毒传播与进化中作用等进行综述,以期为小型野生动物携带病原调查及溯源研究提供一定借鉴。

    2021年05期 v.37 1252-1259页 [查看摘要][在线阅读][下载 911K]
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  • 鸭甲型肝炎病毒VP1研究进展

    王莹;张兴晓;朱洪伟;

    甲型鸭肝炎病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV)是造成雏鸭死亡率高的主要原因之一,给养鸭业带来了巨大的经济损失。而其主要衣壳蛋白VP1由于具有多种优势抗原表位,能够刺激机体产生中和抗体,被广泛认为是DHAV遗传变异的重要依据。本文主要介绍了VP1常见的突变位点及其对病毒特性的影响、VP1的改造和VP1的遗传演化,为进一步了解DHAV的遗传进化,疫苗开发与选择提供参考。

    2021年05期 v.37 1260-1267页 [查看摘要][在线阅读][下载 940K]
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  • 植物检疫性病毒等温扩增检测技术研究进展

    王道;张蓬军;孙凯;胡学难;魏霜;杨倩倩;俞晓平;

    植物病毒严重影响农林作物的产量和质量。随着全球化的快速发展,植物检疫性病毒跨境入侵风险加剧,研发植物检疫性病毒的精准、快速的检测技术对于保障进出口贸易及农林业生产安全具有重要作用。早期植物病毒检测主要基于寄主生物学症状、病毒形态观察以及ELISA为主的血清学检测方法等。当前,核酸扩增技术成为主要的植物病毒检测方法,特别是近20年来发展起来的等温核酸扩增技术,因其具有快速、灵敏、适于现场检测等优势,在许多植物病毒检测中广泛开展研究。其中,我国20余种进境植物检疫性病毒已建立了等温扩增检测技术。本文在综述等温扩增技术原理的基础上,归纳总结了主要等温扩增技术在植物检疫性病毒检测中的研究进展,并对其在口岸检疫的应用前景进行展望。

    2021年05期 v.37 1268-1282页 [查看摘要][在线阅读][下载 1052K]
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信息

  • 《中文核心期刊要目总览》入编通知

    <正>《病毒学报》主编先生/女士:我们谨此郑重通知:依据文献计量学的原理和方法,经研究人员对相关文献的检索、统计和分析,以及学科专家评审,贵刊《病毒学报》入编《中文核心期刊要目总览》2020年版(即第9版)基础医学类的核心期刊。该书由北京大学出版社出版。书中按《中国图书馆分类法》的学科体系,列出了74个学科的核心期刊表,并逐一对核心期刊进行了著录。著录项目包括:刊名、并列刊名、主办单位、出版年、出版频率、中图分类号、ISSN号、CN号、邮发代号、编辑部地址、电话、网址、内容简介等。

    2021年05期 v.37 1283页 [查看摘要][在线阅读][下载 38K]
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  • 2021年中国微生物学会及各专业委员会学术活动计划表

    <正>~~

    2021年05期 v.37 1289-1290页 [查看摘要][在线阅读][下载 110K]
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  • 《病毒学报》征稿简则

    <正>(2018年12月25日修订)《病毒学报》是病毒学专业学术刊物,创刊于1985年,国际标准刊号:ISSN1000-8721,国内统一刊号:CN 11-1865/R,国内邮发代号:82-227,国外发行代号:BM6448。主管单位是中国科学技术协会,主办单位是中国微生物学会,承办单位是中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所。《病毒学报》是中国精品科技期刊;中国科技核心期刊;北京大学基础医学核心期刊(中文期刊要目总览);武汉大学RCCSE(中国科学评价研究中心)中国核心学术期刊。

    2021年05期 v.37 1291页 [查看摘要][在线阅读][下载 711K]
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