阮朝列,施锦丽,李卫东,刘伯川,鲍晓林,廖国阳,杨璐洁,周健

• 1:中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所

摘要(Abstract)：

连续细胞系用于生物制品生产可能会造成宿主成分传递给受种者的问题。为了评估Benzonase核酸酶在细胞流感病毒灭活疫苗中降解宿主细胞残余DNA的效果。本研究采用Vero细胞培养流感病毒H3N2，获得病毒原液后，经“Benzonase核酸酶+300kD超滤膜包+Capto Core 700”（实验组）、“300kD超滤膜包+Capto Core 700”（方案一）和“300kD超滤膜包+Capto Core 700+Capto Q”（方案二）三种纯化方案分别对病毒原液进行纯化，取样检测各步骤的血凝效价、血凝素含量、总蛋白含量、宿主蛋白含量、宿主DNA含量评估对流感病毒的纯化效果，并通过透射电镜观察病毒颗粒形态。灭活验证通过后，按血凝素HA含量为15μg/剂（体积0.5mL）皮下免疫BALB/c小鼠2次，免后14d后分离血清检测抗体滴度水平评价免疫原性。结果显示，实验组最终纯化液病毒的回收率为（66.70±4.87）%，配置为单价制剂后各项指标符合药典要求；方案一最终纯化液病毒回收率为（50.00±3.41）%,rcDNA含量为（28 366.67±1 006.65）pg/mL，配置为单价制剂后rcDNA含量不符合药典要求（<100 pg/剂）；方案二对比方案一增加了阴离子交换，纯化后病毒回收率为（46.83±1.62）%，配置为单价制剂后各项指标符合药典要求。透射电镜结果显示病毒颗粒不会受到核酸酶的影响。免疫原性评价结果显示小鼠血清抗体滴度与对照组无显著差异，表明核酸酶对流感病毒的免疫原性没有影响。另外，Vero细胞DNA经核酸酶处理后，使用毛细管电泳未检测到具有大小的DNA片段，说明核酸酶可以将DNA降解为核苷酸。综上，本研究初步确定Benzonase核酸酶用于Vero细胞为基质的流感病毒灭活疫苗的应用。

关键词(KeyWords)： Benzonase核酸酶;疫苗;残余DNA;流感病毒

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 中国医学科学院医学与健康科技创新工程（项目号：2021-I2M-1-043）,题目：创新疫苗关键技术研究~~

作者(Author): 阮朝列,施锦丽,李卫东,刘伯川,鲍晓林,廖国阳,杨璐洁,周健

DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.004341

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