病毒学报

2021, v.37(06) 1428-1439

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LAT基因簇miRNA的CRISPR/Cas9基因编辑对马立克病病毒体外复制的影响分析
CRISPR/Cas9 System-based Gene Editing of the LAT-clustered MicroRNAs and Its Influence on in vitro Replication of Marek's Disease Virus

楚钰淑;滕蔓;周子誉;石彬;郑鹿平;刘金玲;罗俊;张改平;

摘要(Abstract):

病毒编码的microRNA(miRNA)在马立克病病毒(MDV)的复制、潜伏感染及诱导肿瘤发生中发挥重要的调控功能。血清1型MDV(MDV-1)编码的26个成熟体miRNA在基因组中形成3个基因簇,分别命名为Meq、Mid和LAT miRNA基因簇。本文利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,以超强毒株(vvMDV)国内代表株GX0101为研究对象,设计并合成一系列可实现LAT基因簇miRNA编辑缺失的特异性gRNA组合,成功构建了一株LAT基因簇miRNA缺失毒株GX?LAT-miRs-C21-15。经DNA测序分析、IFA鉴定及RT-qPCR分析,证实LAT基因簇miRNA被完全编辑缺失。该基因缺失毒株传代稳定性良好,miRNA的缺失不影响MDV的体外复制及相关基因表达。本研究基于CRISPR/Cas9系统,获得了稳定的LAT基因簇miRNA编辑缺失毒株,为后续相关miRNA的功能研究奠定了重要基础。

关键词(KeyWords): MDV;CRISPR/Cas9;基因编辑;miRNAs;LAT基因簇;调控功能

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金(项目号:U1604232),题目:鸡马立克病病毒(MDV)遗传、变异与致病的分子机制;; 中原英才计划-中原基础研究领军人才(2019-2020);; 河南省自然科学基金(项目号:212300410359),题目:病毒编码的miR-M11-5p/3p抑制鸡马立克病(MD)肿瘤发生的分子机制;; 河南省重点研发与推广专项(项目号:212102110097),题目:鸡马立克病病毒pp38蛋白的CRISPR基因编辑及单抗筛选与鉴定;; 河南省农业科学院杰出青年科技基金(项目号:2019JQ01),题目:家禽疱疹病毒CRISPR/Cas9基因编辑技术平台的建立与应用~~

作者(Author): 楚钰淑;滕蔓;周子誉;石彬;郑鹿平;刘金玲;罗俊;张改平;

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DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003947

参考文献(References):

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