病毒学报

2021, v.37(05) 1043-1050

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人乳头瘤病毒16型E7过表达细胞的鉴定及其迁移效应的影响
Identification of Transfected Cells with Early Protein 7(E7) of Human Papilloma Virus Type 16 and Impact on Cell Migration

谭晓淳;姜洁;林中民;谢自新;蒋朋飞;张丽芳;李文姝;

摘要(Abstract):

鉴定人乳头瘤病毒16型早期蛋白7(HPV16E7)过表达细胞及其迁移效应的影响,为后续基于HPV16E7靶向分子作用机制的研究奠定工作基础。脂质体转染法将本室保存的pcDNA3.1-HPV16E7重组真核表达质粒分别转染人胚肾293T细胞(HPV16型DNA阴性)、宫颈癌SiHa细胞株(HPV16 DNA阳性),转染48 h后收集细胞,提取RNA,RT-PCR扩增相应的目的基因,Western Blotting和间接免疫荧光实验检测HPV16E7目的蛋白在细胞中的表达。转染24 h的细胞进行细胞划痕和Transwell实验,检测过表达细胞迁移行为的变化。RT-PCR结果显示:分别从E7质粒转染的293T、SiHa细胞的cDNA中,均可扩增到250 bp的目的条带;Western Blotting分析结果显示:以HPV16E7单克隆抗体为检测抗体,转染细胞的裂解液中均能在相对分子质量(Mr)约为15 000处出现特异性目的条带;间接免疫荧光结果显示:转染细胞中均能检测到目的绿色荧光,且分布于胞浆及细胞核周围;细胞划痕和Transwell实验结果显示:转染E7细胞的迁移效应显著提高。本研究证实了HPV16E7转染细胞后可成功表达,且过表达细胞明显促进了细胞迁移行为,为后续基于HPV16E7迁移相关分子机制及靶向干预等研究奠定了前期工作基础。

关键词(KeyWords): 人乳头瘤病毒16型;E7;过表达;迁移

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金(项目号:81973216),题目:负载GrB双靶向HPV16/18亲和毒素抗宫颈癌生物学效应研究;; 浙江省公益技术研究计划项目(项目号:LGF18C010004),题目:HPV16/18 E7双特异性affibody分子靶向特性研究~~

作者(Author): 谭晓淳;姜洁;林中民;谢自新;蒋朋飞;张丽芳;李文姝;

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DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.004012

参考文献(References):

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