黄颡鱼小RNA病毒qPCR检测方法的建立与应用Establishment and Application of TaqMan-qPCR for Detection of Yellow Catfish Picornavirus
穆雪姣,潘晓艺,周可欣,蔺凌云,姚嘉赟,沈锦玉
摘要(Abstract)：
黄颡鱼小RNA病毒（Yellow catfish Picornavirus,YCPrV）是黄颡鱼重要的致死性病原，本研究旨在建立一种快速、精准的YCPrV检测方法。基于YCPrV 22426-8毒株RdRp基因编码区序列设计特异性引物和探针，通过质粒标准品和标准曲线的制作，反应体系和反应条件的优化，灵敏度和特异性的测试，建立一种检测YCPrV的TaqMan荧光定量PCR(qPCR)方法。结果显示，在绘制的qPCR标准曲线中，拷贝数与Ct值具有良好的线性关系，相关系数（R2）为0.9974，扩增效率为88.98%，最高检测灵敏度为5.09×100拷贝。该方法对来自黄颡鱼、鲫鱼、鲤鱼和虾的其它8种病毒无扩增信号，仅YCPrV具有扩增曲线，对临床样品阳性检出率比普通PCR高12.28%。自然感染黄颡鱼组织中YCPrV检测结果发现，病毒载量从高到低依次为肠、肾、心、肝、脾、鳃和脑。以上结果表明，本研究建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法具有良好的特异性、灵敏度和可重复性，临床检测YCPrV时，建议优选肾和心作为检测靶标组织。YCPrV qPCR方法的建立，可为YCPrV的精准定量检测和疾病早期预防提供有利手段。
关键词(KeyWords)： 黄颡鱼;小RNA病毒;病毒性出血病;TaqMan荧光定量PCR
基金项目(Foundation): 湖州市乡村振兴项目（项目号：2020ZD2033）,题目：黄颡鱼暴发病病原及其净化技术集成与示范~~
作者(Author): 穆雪姣,潘晓艺,周可欣,蔺凌云,姚嘉赟,沈锦玉
DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.004316
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