病毒学报

2021, v.37(03) 678-685

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蜜蜂克什米尔病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立和评价
Development and Evaluation of the Detection Method of Real-time RT-PCR Assays for Kashmir Bee Virus

张体银;邵碧英;林素洁;郑腾;王武军;张志灯;

摘要(Abstract):

蜜蜂克什米尔病毒(Kashmir bee virus,KBV)是一种高毒力的急性蜜蜂病毒,可以引起蜜蜂的死亡和蜂群崩溃。本研究旨在建立一种灵敏、快速检测KBV的TaqMan实时荧光RT-PCR检测方法。参照GenBank中polymerase polyprotein有关基因序列,设计一组特异性引物和探针,并通过体外转录法制备RNA标准品作为阳性模板。在对反应体系进行优化的基础上,建立了KBV的实时荧光RT-PCR检测方法并进行了特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床样本验证。结果显示:该方法能有效扩增8×100拷贝/μL~8×10~7拷贝/μL的KBV标准品,建立的标准曲线呈现良好的线性关系。该方法的检测灵敏度为8拷贝/μL,对其他蜜蜂病毒不发生交叉反应,具有很好的特异性;重复性试验结果显示组内和组间的变异系数分别低于1%和2%,重复性良好。应用本研究建立方法与常规RT-PCR方法对样品进行检测,TaqMan实时荧光RT-PCR检测方法的特异性优于常规RT-PCR。本研究建立的实时荧光RT-PCR检测具有良好的敏感性、特异性和重复性,为KBV的检测和流行病学调查提供技术支持。

关键词(KeyWords): 蜜蜂克什米尔病毒;实时荧光RT-PCR;检测方法

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 福建省对外合作项目(项目号:2018I0022),题目:7种常见蜜蜂病毒病快速检测技术研究~~

作者(Author): 张体银;邵碧英;林素洁;郑腾;王武军;张志灯;

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DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003937

参考文献(References):

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