孙权麟;马跃宇;孙莉;费东亮;白杰英;张旭;李明;马鸣潇;

• 1:锦州医科大学
• 2:北京大学未来技术学院分子医学研究院
• 3:锦州市疾病预防控制中心

摘要(Abstract)：

仙台病毒（Sendai virus, SeV）能够引起啮齿类动物呼吸道疾病，引起免疫应答，严重影响SPF级动物模型实验结果，实验动物质量国家标准T/CALAS49-2017也将其作为SPF级大小鼠质量检测必检项目之一。为了开发用于快速检测及日常监测SeV的分子生物学诊断方法，本研究基于TaqMan-MGB探针荧光技术，根据GenBank中SeV的L基因的保守区段（8 556-15 242）序列，设计了1对特异性引物与1条5‵端携带羧基荧光素（FAM）与3‵端为淬灭基团（Eclipse）标记的TaqMan探针，标准品进行稀释建立标准曲线，并经反应条件优化，建立了TaqMan-MGB探针荧光定量RT-PCR检测方法，并对其特异性、敏感性与重复性进行评估。结果显示，最佳优化反应条件为：反应体系，20μmol/L；引物和探针浓度，10μmol/L和15μmol/L；退火温度，54℃；在特异性试验中，除SeV检测出现特异性曲线外，其他鼠类常见病毒均未出现特异性曲线；在敏感性试验中，Sev最低检测限为5.29×101拷贝/μL。在重复性试验中，其批内变异系数为0.44%～0.77%，批间变异系数为0.44%～1.03%。对临床样本进行检测，检出率高于常规的RT-PCR方法。因此，以SeV L基因保守序列为靶基因建立的TaqMan探针荧光定量RT-PCR方法具有敏感性高、特异性强、良好的重复性等优点，适用于对SPF级实验动物的SeV定期监测以及对野生鼠类的SeV日常监测和流行病学调查，为相关研究提供了良好的技术支持。

关键词(KeyWords)： 仙台病毒(SeV);TaqMan-MGB探针;qRT-PCR方法

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 辽宁省科技厅科学技术计划项目（项目号：2020JH2/10300117）,题目：免洗纳米等离子体免疫检测法用于检测兔瘟病毒和仙台病毒~~

作者(Authors): 孙权麟;马跃宇;孙莉;费东亮;白杰英;张旭;李明;马鸣潇;

DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.004242

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