逆转录重组酶介导的等温扩增技术快速检测甲型H1N1流感病毒Reverse Transcription Recombinase-aided Amplification Technology for Rapid Detection of Influenza A Virus H1N1
安柏霖;郭悦;刘丹丹;罗君红;葛以跃;朱凤才;崔仑标;赵康辰;
摘要(Abstract)：
利用逆转录重组酶介导的等温扩增技术（Reverse transcription-recombinase aided amplification, RT-RAA）与RT-RAA单链荧光探针结合，建立甲型H1N1流感病毒（Influenza A virus H1N1, FLU A H1N1）的快速分子检测方法。设计RT-RAA引物和荧光探针，用于FLU A H1N1模板核酸的等温扩增和荧光检测，以评价优化方法的灵敏度与特异性；将实时荧光定量PCR(real-time PCR)作为对照方法，测试RT-RAA荧光方法对临床样本的检测效果。FLU A H1N1的RT-RAA荧光检测方法能在30 min内完成检测，灵敏度达到101拷贝/μL；特异性试验表明，其与十六种常见呼吸道传染性病毒均无交叉反应。49份临床样本检测结果和real-time PCR检测结果一致性高（Kappa=0.958），临床灵敏度为100%，临床特异性为95.2%。建立的RT-RAA荧光检测方法检测时间短，灵敏度高，特异性强，适用于FLU A H1N1的快速检测。
关键词(KeyWords)： RT-RAA;real-time PCR;甲型流感病毒;H1N1;等温扩增;快速检测
基金项目(Foundation): 江苏省社会发展面上项目（项目号：BE2019761）,题目：基于离心力微流控芯片的重要境外输入性传染病核酸即时检测技术及应用;; 江苏省社会发展重点项目（项目号：BE2020682）,题目：重大传染病特异性诊断试剂开发与标准化示范~~
作者(Authors): 安柏霖;郭悦;刘丹丹;罗君红;葛以跃;朱凤才;崔仑标;赵康辰;
DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.004266
参考文献(References)：
- [1] Nicholson K G, Wood J M, Zambon M. Influenza[J].Lancet, 2003, 362(9397):1733-1745.
- [2]王菊，伍义兰，张龙举.国内三十年甲型H1N1流感临床及流行特点分析[J/OL].中国呼吸与危重监护杂志，2021, 20(03):164-169. DOI:10.1016/S0140-6736(03)14854-4.
- [3] Shao W, Li X, Goraya MU, Wang S, Chen JL.Evolution of influenza A virus by mutation and reassortment[J/OL]. Int J Mol Sci, 2017, 18(8):1650.DOI:10.3390/ijms18081650.
- [4] Chen H, Wang H, Li X, You L, Wei J, Shi W.Evaluation of a rapid detection influenza virus a antigens kit using paired serum antibody test[J/OL]. Yonsei Med J, 2013, 54(2):476-479. DOI:10.3349/ymj.2013.54.2.476.
- [5] Woong Sik Jang, Da Hye Lim, Jeonghun Nam, DoCiC Mihn, Haan Woo Sung, Chae Seung Lim, Jeeyong Kim. Development of a multiplex isothermal amplification molecular diagnosis method for on-site diagnosis of influenza[J/OL]. PLoS One, 2020, 15(9):e0238615. DOI:10.1371/journal.pone.0238615.
- [6]施琦，邹大阳，杨宇，慈颖，张乔，聂聪，张永江，刘威，王静.建立可视化甲型H1N1流感病毒的聚合酶螺旋反应检测方法[J/OL].中国国境卫生检疫杂志，2021, 44(04):241-245. DOI:10.16408/j. 1004-9770.2021.04.004.
- [7] Mayuramart O, Nimsamer P, Rattanaburi S,Chantaravisoot N, Khongnomnan K, Chansaenroj J,Puenpa J, Suntronwong N, Vichaiwattana P,Poovorawan Y,&Payungporn, S. Detection of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 and influenza viruses based on CRISPR-Cas12a[J/OL]. Exp Biol Med, 2021, 246(4):400-405. DOI:10.1177/1535370220963793.
- [8] Wang S, Huang B, Ma X, Liu P, Wang Y, Zhang X,Zhu L, Fan Q, Sun Y, Wang K. Reverse-transcription recombinase-aided amplification assay for H7 subtype avian influenza virus[J/OL]. Transbound Emerg Dis,2020, 67(2):877-883. DOI:10.1111/tbed.13411.
- [9] World Health Organization. CDC protocol of realtime RTPCR for swine influenza A(H1N1)[J/OL]. Geneva WHO, 2009. DOI:17766.
- [10]葛以跃，谭焰，陈晨，吴涛，朱小娟，赵康辰，王丽，谷伟，崔仑标. 17例病毒性肺炎老年患者的临床特点及甲型H1N1流感病毒分子特征[J/OL].中华实验和临床病毒学杂志，2018, 32(6):576-581. DOI:10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2018.06.004.
- [11]李明，苏维，马士恒，王涛，程雪娜.甲型H1N1型流感患者外周血程序化细胞死亡分子5表达水平及其与疾病严重程度的相关性[J/OL].医学研究生学报，2018, 31(6):636-640. DOI:10.16571/j. cnki. 1008-8199.2018.06.015.
- [12]Angelena M. Labella, Susan E Merel. Merel L.Influenza[J/OL]. Med Clin N Am, 2013, 97(4):621-645. DOI:10.1016/j.mcna.2013.03.001.
- [13]李玉香，汪杨，鲍万国，张凯宇，王峰，于振香.重症甲型H1N1流感病毒基因与特异性抗体检测的诊断意义[J/OL].中华医院感染学杂志，2015, 25(12):2641-2643. DOI:10.11816/cn.ni.2015-141610.
- [14]戴玉柱，崔大伟，杨先知，谢国良，成军，孙长贵，王国政，金美彤，李静云.五重荧光定量RT-PCR法检测甲型流感病毒[J/OL].临床检验杂志，2015, 33(09):641-644. DOI:10.13602/j.cnki.jcls.2015.09.01.
- [15]唐钧，曹红梅.甲型H1N1流感病毒RNA检测方法的建立及临床应用[J/OL].检验医学，2021, 36(7):5.DOI:10.3969/j.issn.1673-8640.2021.07.013.