病毒学报

2021, v.37(05) 1119-1127

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鉴别检测非洲猪瘟野毒株和基因缺失疫苗株的三重荧光PCR的建立
Establishment of A Triplex Real-time PCR Assay for Detection and Differentiation of Gene-deleted Vaccine Strains from Wild-type African Swine Fever Virus Strains

林彦星;史卫军;曹琛福;黄超华;曾少灵;吴江;徐鹏;花群义;

摘要(Abstract):

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(African swine fever,ASFV)引起的猪的一种急性、高度接触性传染病。本研究根据ASFV B646L、MGF360-14L和CD2v基因设计了3套引物和探针,建立了可同时鉴别检测ASFV野毒株和基因缺失疫苗株的三重荧光PCR方法。结果表明,该法特异性强,可同时检测ASFV B646L、MGF360-14L和CD2v基因,与猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、猪A型塞内卡病毒等无交叉反应;两份ASFV MGF360-505R与CD2v基因联合缺失疫苗株DNA三重荧光PCR法检测结果都仅出现一条B646L扩增曲线,与预期一致;灵敏度高,该法对重组质粒pUC-B646L、pUC-360-14L和pUC-CD2v的检出限分别为1.572×10~3拷贝/mL、1.934×10~3拷贝/mL和1.929×10~3拷贝/mL,灵敏度比世界动物卫生组织(World organization for animal health,OIE)推荐的荧光PCR高10倍;重复性好,对三种重组质粒检测的Ct值批内和批间变异系数均小于2%;应用该法及OIE推荐的荧光PCR对1 215份样品进行平行检测,结果显示23份样品为阳性,1 192份样品为阴性,两种方法检测结果一致。本研究建立的方法能鉴别检测ASFV野毒株和基因缺失疫苗株(缺失MGF360-505R和/或CD2v基因),对将来基因缺失疫苗的推广应用及ASF疫情防控具有重要的意义。

关键词(KeyWords): 非洲猪瘟病毒(ASFV);基因缺失疫苗;荧光PCR;鉴别;检测

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家重点研发计划项目资助(项目号:2018YFC0840401),题目:非洲猪瘟病毒流行病学与检测技术研究;国家重点研发计划项目资助(项目号:2016YFD0500708),题目:猪重要疫病分子检测技术研究;; 海关总署科研项目(项目号:2019HK019),题目:非洲猪瘟病毒核酸快速检测方法的建立与应用~~

作者(Author): 林彦星;史卫军;曹琛福;黄超华;曾少灵;吴江;徐鹏;花群义;

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DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.004040

参考文献(References):

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