病毒学报

2021, v.37(06) 1317-1325

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基于GII.4型诺如病毒P蛋白的GII型广谱单克隆抗体制备及应用
Preparation and Application of GII Norovirus Broad-spectrum Monoclonal Antibody Based on GII.4 Norovirus P Protein

高珺珊;薛亮;蔡伟程;廖颖茵;左月婷;张菊梅;吴清平;

摘要(Abstract):

人源诺如病毒(Human noroviruses,HuNoVs)是全球引起急性胃肠炎的重要传染病原。该病毒遗传多样性丰富,包括了5个基因群以及39种基因型,免疫学检测受限。因此,本研究旨在制备广谱性的HuNoV单克隆抗体,并建立可检测多种基因型的双抗体夹心ELISA方法。本研究通过表达纯化流行毒株GII.4型HuNoVs衣壳蛋白P颗粒免疫Balb/c小鼠,筛选出3株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体并进行评价。利用辣根过氧化物酶对抗体进行标记及配对筛选,建立了HuNoVs双抗夹心ELISA检测方法,并进行验证。结果显示:B10、1D6、1C1细胞株可分泌广谱性单克隆抗体。所建立的双抗夹心ELISA方法酶标抗体最佳工作浓度为1∶5 000,捕获抗体最佳包被浓度为2.0μg/mL,该方法检测GII.4型P颗粒最低检出限为125.0ng/mL,对常见HuNoVs GII.2、GII.3、GII.4、GII.6、GII.17基因型样本均能检出,而与轮状病毒、星状病毒、肠道病毒、札幌病毒无交叉反应。批间与批内重复变异系数均小于7%。临床样本检测结果显示,本方法与荧光定量RT-PCR结果的符合率为84%。本研究成功制备了广谱性的HuNoVs衣壳蛋白单克隆抗体,建立了可应用于HuNoVs流行毒株基因型的双抗夹心ELISA检测方法,为HuNoVs的诊断及流行病学调查提供了一种简便、特异的免疫学方法。

关键词(KeyWords): 人源诺如病毒;GII.4型;单克隆抗体;双抗夹心ELISA;检测方法

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金项目(项目号:31872912),题目:食源性诺如病毒次衣壳蛋白VP2在与主衣壳蛋白VP1互作中的共进化机制;; 广东省自然科学基金杰出青年基金(项目号:2019B151502065),题目:食源性诺如病毒的科学大数据库构建与危害进化机制研究;; 广东省重点领域研发计划项目(项目号:2019B020209001),题目:食源性致病微生物科学大数据库构建;; 广东省科学院发展专项资金项目(项目号:2020GDASYL-20200104008)题目:基于型别特征抗体资源库的新型诺如病毒免疫层析检测技术研究~~

作者(Author): 高珺珊;薛亮;蔡伟程;廖颖茵;左月婷;张菊梅;吴清平;

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DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003923

参考文献(References):

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