• LAT基因簇miRNA的CRISPR/Cas9基因编辑对马立克病病毒体外复制的影响分析

    楚钰淑;滕蔓;周子誉;石彬;郑鹿平;刘金玲;罗俊;张改平

    病毒编码的microRNA(miRNA)在马立克病病毒(MDV)的复制、潜伏感染及诱导肿瘤发生中发挥重要的调控功能。血清1型MDV(MDV-1)编码的26个成熟体miRNA在基因组中形成3个基因簇,分别命名为Meq、Mid和LAT miRNA基因簇。本文利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,以超强毒株(vvMDV)国内代表株GX0101为研究对象,设计并合成一系列可实现LAT基因簇miRNA编辑缺失的特异性gRNA组合,成功构建了一株LAT基因簇miRNA缺失毒株GX?LAT-miRs-C21-15。经DNA测序分析、IFA鉴定及RT-qPCR分析,证实LAT基因簇miRNA被完全编辑缺失。该基因缺失毒株传代稳定性良好,miRNA的缺失不影响MDV的体外复制及相关基因表达。本研究基于CRISPR/Cas9系统,获得了稳定的LAT基因簇miRNA编辑缺失毒株,为后续相关miRNA的功能研究奠定了重要基础。

    网络首发时间: 2021-04-16 16:25:57[查看摘要][在线阅读][下载 862K]
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  • 狂犬病疫苗接种者血清对狂犬病病毒中和能力研究

    霍明赫;许炜迪;冯华超;刘婷芳;衣惠鑫;刘艳;涂长春;马继红;冯烨

    狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒属成员(Lyssavirus)引起的人兽共患病,全球99%以上人狂犬病是由该属主要成员狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)引起的。近年来,我国RABV毒株多样性明显增多,但是现有狂犬病疫苗对不同毒株(特别是新出现的毒株)免疫保护效果尚不清楚。为研究目前商品化的人用狂犬病疫苗对RABV街毒株是否具备交叉免疫保护能力,本研究通过制备不同进化群、不同宿主来源的3株街毒株GDMMD16、NMALSF01和NeiMeng927A的细胞毒,分别对免疫过aG株和/或PM株狂犬病疫苗的23份人血清进行狂犬病荧光抗体病毒中和实验,结果发现所有血清对GDMMD16、NMALSF01和NeiMeng927A街毒株的中和效价均高于WHO推荐的标准(0.5IU/mL),表明上述2种商品化的人用狂犬病疫苗对3株RABV街毒株具有保护能力。

    网络首发时间: 2021-04-16 15:49:26[查看摘要][在线阅读][下载 425K]
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  • HPV感染致HeLa细胞肿瘤标志物水平的变化

    王丽;邹月萍

    人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)是宫颈癌的重要病因学因素。肿瘤标志物能评估肿瘤的发生与发展,宫颈癌相关肿瘤标志物包括鳞状细胞癌(Squamous cell carcinoma,SCC)相关抗原、癌胚抗原(Carcinoembryonic atigen,CEA)、糖类抗原(Carbohydrate antigen,CA)125和CA19-9。为探索不同类型HPV对宫颈癌细胞(HeLa细胞)肿瘤标志物的影响,为宫颈癌早期诊断及病情评估提供理论参考,本研究收集2019年1月至6月在西南医科大学附属医院妇科接受宫颈检查的受试者宫颈上皮细胞样本,提取不同种类HPV接种于HeLa细胞。根据所接种的HPV类型不同,将HeLa细胞分为高危型组、中危型组、低危型组以及阴性组。以Q-PCR及Western Blot方法检测SCC及CEA基因与蛋白的相对表达量,以ELISA法检测CA125及CA19-9表达水平。Q-PCR结果显示:与阴性组相比,高危组、中危组和低危组三组SCC与CEA基因相对表达量明显增高(P<0.05);三组间两两比较,均有统计学差异(P<0.05),其中高危组表达量>中危组>低危组;Western Blot结果可见:与阴性组相比,高危组、中危组和低危组三组SCC与CEA蛋白相对表达量明显增高(P<0.05);三组间两两比较,均有统计学差异(P<0.05),其中高危组表达量>中危组>低危组;ELISA检测结果可见:与阴性组相比,高危组、中危组和低危组三组CA125与CA19-9其表达量明显增高(P <0.05);三组间两两比较,均有统计学差异(P <0.05),其中高危组表达量>中危组>低危组。本研究提示,不同致病类型HPV与肿瘤标志物表达呈相关性,HPV危险程度越高,其肿瘤标志物表达量越大。

    网络首发时间: 2021-04-14 14:51:09[查看摘要][在线阅读][下载 514K]
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  • 纤维顶球改造增强了人5型腺病毒载体对造血细胞的感染

    郭小娟;梅玲玲;付鸿臣;邹小辉;鲁茁壮;洪涛

    基于人5型腺病毒(Human adenovirus type 5,HAdV-5)的腺病毒载体对造血细胞的基因转导效率低,将病毒fiber基因替换为HAdV-11p的同源基因F11p后,载体对造血细胞的感染效率增强。本研究拟在F11p纤维顶球(knob)结构域添加RGD4C多肽或HIV包膜糖蛋白(gp120)的V3结构域,观察重组HAdV-5对造血细胞感染效率的变化。在前期构建的pKAd5f11p153R-EPG腺病毒质粒基础上,结合限制性酶切和DNA组装技术,在F11p 153aa后(knob AB loop,153位)、228位(FG loop)以及300位(IJ loop)插入RGD4C肽或者gp120的V3肽,构建了共6种重组腺病毒载体(F153RGD-EG、F228RGD-EG、F300RGD-EG、F153CV-EG、F228CV-EG和F300CV-EG),以fiber未改造的HAdV5-EG和改造为F11p的F11p-EG病毒作对照,观察了其对4种造血细胞系U937、K562、Jurkat和HL60以及人原代T细胞的感染效率。结果显示,对于U937细胞,当感染复数(MOI,vp/cell)为100时,HAdV5-EG感染效率最低,为2%;其次为F228CV-EG,感染率为45%;F300RGD-EG、F153CV-EG和F300CV-EG感染率为85%~90%;F153RGD-EG、F228RGD-EG高于阳性对照病毒F11p-EG,三者分别为99%、99%、95%。各病毒对于Jurkat细胞的感染率均较高,但HAdV5-EG明显低于F11p-EG、F153RGD-EG和F228RGD-EG,当MOI为100时分别为75%、93%、93%和96%。感染K562细胞的情况与U937细胞类似。各病毒对于HL60细胞感染效率最低,MOI为500时,F300RGD-EG和F300CV-EG的转导效率为28%和33%,是F11p-EG的10倍。对于人原代T细胞,F153RGD-EG和F228RGD-EG优于F11p-EG,当MOI为1 000时,感染率分别为87%、90%和84%。研究结果表明,F11p knob插入RGD4C比单独F11p替换的HAdV-5对造血细胞的感染效率高,同时,本研究还发现HAdV-11p fiber knob的AB、FG或IJ loop可插入外源多肽,为腺病毒嗜向性改造增加了新靶点。

    网络首发时间: 2021-04-13 09:56:14[查看摘要][在线阅读][下载 1288K]
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  • 福建省脊髓灰质炎疫苗转换前后AFP病例病原学监测结果分析

    郑凝旋;陈致飞;张苏晗;李东;张海荣;杨秀惠;潘伟毅;周勇

    自2016年5月1日起,我国与全球另外154个国家和地区同步实施脊髓灰质炎(以下简称“脊灰”)疫苗免疫策略转换,停用三价口服脊灰减毒活疫苗,改用二价口服脊灰减毒活疫苗。为探讨脊灰疫苗转换对福建省急性弛缓性麻痹(Acute flaccid paralysis,AFP)病例监测结果产生的变化,本研究收集2012-2018年福建省AFP病例的流行病学及实验室监测数据,对脊灰疫苗转换前后AFP病例的监测结果进行描述性分析,采集AFP病例及其接触者粪便标本,并使用RD细胞和L20B细胞进行病毒分离;对L20B阳性分离物进行脊灰病毒(Poliovirus,PV)的型内鉴别(Intratypic differentiation,ITD),对PV衣壳蛋白VP1编码区核苷酸序列测定和分析。使用SPSS 21.0软件对数据进行统计检验,比较采用χ2检验。结果显示,2012-2018年福建省累计报告AFP病例1 776例,根据AFP病例分类流程确诊的AFP病例1 283例,排除的非AFP病例493例,疫苗转换前后报告发病率平均为2.83/10万和2.71/10万。实验室共检测3 123份粪便标本(包括AFP病例、非AFP病例及接触者),其中合格标本采集率为92.42%,7日及时送检率为97.85%,14日内病毒分离完成率接近100%,疫苗转换前后PV平均分离率分别为1.91%(38/1986)、1.58%(18/1 137),非脊灰肠道病毒平均分离率分别为10.22%(203/1 986)、5.45%(62/1 137)。2016年5月1日之前分离出Ⅰ型PV 6株,Ⅱ型PV 13株,Ⅲ型PV 19株;2016年5月1日之后分离出Ⅰ型PV 6株,Ⅲ型PV 12株。本研究结果提示,脊灰疫苗转换前后福建省AFP监测系统运转正常,始终保持较高的敏感性和及时性。2012-2018年福建省分离出的PV均为脊灰疫苗株,毒株血清型别以Ⅲ型为主,VP1编码区核苷酸以低变异为主,未发现疫苗衍生脊灰病毒及脊灰野病毒,疫苗转换后再未检出II型PV,提示II型脊灰疫苗株病毒可能已被阻断。

    网络首发时间: 2021-04-12 17:13:15[查看摘要][在线阅读][下载 442K]
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  • 基于Web of Science对COVID-19的研究现状分析

    王明宇;张馨月;王世钰;隋心;曾宪楠

    在新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情暴发的大背景之下,为进一步了解和明确COVID-19当前研究的全球现状和热点,本研究基于Web of Science数据库对该主题进行检索,对自疫情暴发到2020年4月30日新型冠状病毒(SARS-CoV-2)领域的SCI文献进行计量学分析,探讨SARS-CoV-2的研究重点以及研究现状。本研究通过对SARS-CoV-2相关文献的信息获取、处理、分析,应用文献计量学方法对该研究领域进行研究态势分析。统计分析数据及可视化数据分析结果表明,以“COVID-19 or Novel coronavirus pneumonia”为主题词,搜索到文献共计1 523篇;在现阶段处于研究的初期,在该领域中国发文量排名第一位;伦敦大学、哈佛大学和华中科技大学是世界范围内发文量前三名的机构;并对高频关键词进行类群整理明确研究热点为COVID-19、SARS以及public health(公共卫生)。研究发现,中国学者在“COVID-19”领域的研究取得了快速发展,在文章的影响力、发文量上都属于世界前沿水平。

    网络首发时间: 2021-04-12 16:31:00[查看摘要][在线阅读][下载 758K]
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  • 中国人类病毒传染病的研究进展及可视化分析

    陆皖行;卢凯迪;苟洪伟;黄金华;徐玲玲;赵铁军

    病毒性出血热、流感和病毒性肝炎等传染病的流行与暴发,提示着病毒性传染病一直是人类健康的威胁,各国都非常重视该领域的研究。为了解我国人类病毒传染病相关研究领域热点的分布、变化历程及发展趋势,以中国知网(CNKI)数据库为检索对象,应用CiteSpace可视化软件近对20年内该领域的发文量、作者、机构、关键词等进行分析。通过该方法最终检索出30 875篇文献,分析发现该研究领域年发文量虽有所波动,但年均发文量在1 500篇左右,说明该领域的研究处在平稳期阶段。由于病毒传染病研究具有极强的特殊性,所以我国的研究机构主要以中国疾病预防中心为主。同时发现近20年我国研究热点主要集中在肝炎、出血热、流感、人类免疫缺陷病毒(Human immuno-deficiency virus,HIV)、严重急性呼吸综合征(Severe acute respiratory syndrome,SARS)等方面,其中对肝炎、流感、HIV的研究热度一直持续至今,呈现出研究热点变化与社会发展需求紧密联合的现象。从研究内容变化的历程上分析,能预测我国未来病毒传染病研究领域将向疫情预防以及疾病攻克方面侧重。

    网络首发时间: 2021-04-12 15:52:50[查看摘要][在线阅读][下载 882K]
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  • 4例新型冠状病毒感染病例鼻拭子、咽拭子病毒核酸检测和血浆抗体检测结果分析

    陈荣华;李勤光;赵敏;陈惠聪;康惠玲;柳丽娟

    新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测和血浆抗体检测是目前确诊新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的重要依据。为比较分析SARS-CoV-2感染病例鼻拭子与咽拭子的病毒核酸检测及其血浆病毒抗体检测结果,本研究采用实时荧光定量PCR方法,分别检测4例COVID-19确诊病例鼻拭子与咽拭子标本的SARS-CoV-2 ORF 1ab基因和N基因,并采用胶体金法检测血浆标本中的SARS-CoV-2 IgM和IgG抗体。结果显示,在4例COVID-19确诊病例中,鼻拭子中病毒ORF 1ab基因及N基因的核酸扩增信号均强于咽拭子,Ct值均低于咽拭子;血浆病毒抗体检测仅发现1例标本SARS-CoV-2 IgG单阳性。本研究结果提示,鼻拭子标本的病毒含量明显高于咽拭子标本,血浆病毒IgM和IgG抗体检测是COVID-19辅助临床诊断的有效工具。

    网络首发时间: 2021-04-08 17:02:37[查看摘要][在线阅读][下载 1162K]
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  • 狂犬疫苗糖蛋白ELISA定量分析方法的建立及验证

    叶珂;张志高;何春辉;方浩霖;林冠峰;卞论;许四宏;吴英松

    为狂犬疫苗生产质量控制建立简便、高效、精准的糖蛋白体外效力分析方法,研制适用于狂犬疫苗生产质量控制的狂犬病毒糖蛋白酶联免疫吸附(ELISA)定量分析试剂。采用双抗体夹心法建立狂犬病毒糖蛋白ELISA定量分析体系,优化反应各项参数后考核试剂性能。线性范围为1~180 mIU/mL,灵敏度为0.4497 mIU/mL,分析内变异系数为5.8%~8.2%,分析间变异系数为7.2%~14.4%。用自制试剂与National Institutes of Health(NIH)动物法平行检测10份疫苗相关样品,两种方法测定结果的相对系数r2为0.8943,相关性良好。自制ELISA试剂各项性能指标良好,且与NIH动物法检测结果相关性良好,有望推广用于狂犬疫苗生产质量控制。

    网络首发时间: 2021-04-08 15:47:19[查看摘要][在线阅读][下载 1298K]
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  • 宿主miRNA参与甲型流感病毒复制调控研究进展

    郭寿清;廖月姣;乔自林;王家敏;李倬;刘振斌

    流行性感冒(简称“流感”)是由流感病毒引起的急性呼吸道传染疾病,据世界卫生组织统计,流感每年可导致300万严重病例~500万严重病例,其中29万病例~65万病例死亡,给社会带来沉重的经济负担,是一个世界性的公共卫生难题。研究发现宿主细胞中存在多条信号通路参与对流感病毒感染的应答,越来越多的研究表明宿主miRNAs通过直接或间接的方式,在流感病毒感染、复制的不同阶段发挥着重要调控作用。本文综合分析了目前关于宿主细胞miRNA对流感病毒复制调控的研究进展,对不同的miRNA具体的调控机制进行系统地归类总结后发现:甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)的PB1、PB2、NA、NP、M1基因是宿主miRNA直接抑制病毒复制的主要靶基因,而在间接调控过程中宿主miRNA主要作用在RIG-I样受体信号通路,Jak-STAT信号通路和Toll样受体信号通路三条流感病毒应答信号途径中,以上发现将更有助于全面理解宿主miRNA对于流感病毒调控网络和宿主细胞与流感病毒的互作机制。

    网络首发时间: 2021-04-06 09:37:04[查看摘要][在线阅读][下载 522K]
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  • 蜜蜂克什米尔病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立和评价

    张体银;邵碧英;林素洁;郑腾;王武军;张志灯

    蜜蜂克什米尔病毒(Kashmir bee virus,KBV)是一种高毒力的急性蜜蜂病毒,可以引起蜜蜂的死亡和蜂群崩溃。本研究旨在建立一种灵敏、快速检测KBV的TaqMan实时荧光RT-PCR检测方法。参照GenBank中polymerase polyprotein有关基因序列,设计一组特异性引物和探针,并通过体外转录法制备RNA标准品作为阳性模板。在对反应体系进行优化的基础上,建立了KBV的实时荧光RT-PCR检测方法并进行了特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床样本验证。结果显示:该方法能有效扩增8×100拷贝/μL~8×107拷贝/μL的KBV标准品,建立的标准曲线呈现良好的线性关系。该方法的检测灵敏度为8拷贝/μL,对其他蜜蜂病毒不发生交叉反应,具有很好的特异性;重复性试验结果显示组内和组间的变异系数分别低于1%和2%,重复性良好。应用本研究建立方法与常规RT-PCR方法对样品进行检测,TaqMan实时荧光RT-PCR检测方法的特异性优于常规RT-PCR。本研究建立的实时荧光RT-PCR检测具有良好的敏感性、特异性和重复性,为KBV的检测和流行病学调查提供技术支持。

    网络首发时间: 2021-04-06 08:54:55[查看摘要][在线阅读][下载 632K]
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  • 2020年我国风疹流行病学和病毒基因特征分析

    刘莹;崔爱利;郭晋源;邓丽丽;范丽霞;魏欢;刘李;丛艳丽;唐小敏;雷玥;周淑洁;彭晓放;周珺;冯燕;张燕;毛乃颖;许文波;朱贞

    为了解2020年我国风疹流行病学特征以及流行风疹病毒(Rubella virus,RV)的基因特征,本研究收集整理全国麻疹/风疹监测信息报告管理系统中2020年中国风疹发病数据,分析其流行病学特征;同时,依托全国麻疹/风疹实验室网络获得RV分离株,经鉴定后扩增并测定阳性RV分离株的靶基因序列——E1基因的739个核苷酸片段,并与WHO推荐的基因型参考株序列以及已发表的基因亚型参考株序列进行比对确定基因型和亚型,同时与我国2000-2019年间流行的RV进行亲缘性关系分析。结果显示,2020年中国风疹报告发病率为0.18/10万,继2018-2019年风疹的复发和暴发后出现大幅下降,发病人群年龄组主要为10-29岁无免疫史的青少年和成人;2020年我国RV流行的主要基因亚型为1E-L2与2B-L2c,为2018-2019年间检测到的境外输入性病毒。因此,在实施有效的风疹疫苗免疫后,我国本土流行的病毒逐渐被阻断,然而由于我国风疹易感人群的累积和输入性病毒的持续传播导致了我国近些年风疹疫情的回升。鉴于此,我国应根据现状制定更加切实有效的风疹疫苗免疫策略,消除青少年和成年人中的易感人群;同时应进一步加强风疹流行病学和病毒学监测,从而科学地阻断输入病毒的传播。

    网络首发时间: 2021-04-02 16:46:44[查看摘要][在线阅读][下载 953K]
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  • 安徽省2017-2018年手足口病柯萨奇病毒A6型基因进化特征分析

    史永林;葛盈露;马婉婉;陈芳;陈国平;孙永;苏斌

    人肠道病毒A组71型(Enterovirus A71,EV-A71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CV-A16)是引起手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)的主要病原体。近年来非EV-A71和非CV-A16的其他肠道病毒(Enterovirus,EV)已成为HFMD流行或暴发疫情的优势病原体。安徽省HFMD监测数据显示,2017-2018年HFMD样本非EV-A71和非CV-A16其他EV核酸阳性率超过50%,其中大部分为柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)。为了解安徽省2017-2018年HFMD其他肠道病毒构成和CV-A6基因进化特征,本研究收集2017-2018年HFMD咽拭子EV核酸阳性标本,采用人横纹肌肉瘤(RD)细胞进行病毒分离培养,对分离到的CV-A6毒株VP1全长序列基因扩增及核苷酸序列测定。从NCBI GenBank数据库下载CV-A6原型株和代表性毒株基因参考序列,运用生物软件MEGA 6.0构建VP1基因序列系统进化树,分析其基因遗传特征。结果显示,安徽省2017-2018年HFMD实验室确诊病例其他EV占66.1%,CV-A16占23.5%,EV-A71占10.4%。52株CVA6毒株均为D3a基因亚型,其VP1区核苷酸序列间相似度为93.7%~100%,编码的氨基酸序列相似度为98.3%~100%;与CV-A6 Gdula原型株核苷酸相似度为78%~82.3%,氨基酸相似度为94.6%~96.3%。VP1区15个氨基酸位点有变异,氨基酸位点Q98L和G160S的变异发生率为100%。其他EV已成为安徽省引起HFMD流行的重要病原体,D3基因型CV-A6为优势流行毒株。持续加强其他EV的病原学监测与分析,对安徽省HFMD防控策略制定与疫情处置具有重要意义。

    网络首发时间: 2021-04-02 15:18:59[查看摘要][在线阅读][下载 610K]
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  • 江苏省2017年新报告HIV感染者治疗前耐药分析及基因亚型分布

    周莹;殷玥琪;胡海洋;卢静;张之;徐晓琴;傅更锋

    基于大样本量的亚型及治疗前耐药分析,更准确地掌握江苏省HIV-1流行亚型,更真实地评估江苏省治疗前耐药水平并为抗病毒治疗的开展提供依据收集2017年全年全江苏省新报告感染者治疗前血样。逆转录PCR扩增HIV-1蛋白酶区(pol)基因并送测序。ChromasPro剪辑,拼接,合成序列。MEGA7做序列比对并构建进化树分析亚型。序列在线比对耐药位点。治疗前耐药分析,耐药率达16.3%。蛋白酶区(PR)主要耐药位点是L33F,占44.4%。核苷酸逆转录酶区(NRTI)主要耐药位点是M184位点变异,占35%。非核苷酸逆转录酶区(NNRTI)耐药位点主要是V179位点变异,占59.2%。CRF01_AE亚型(456,37.7%)和CRF07_BC亚型(381,31.6%)仍为江苏省主要流行亚型;不同的是复杂重组体(CPXs)和独特重组体(URFs)数量极速上升至第三位(241,19.9%)。江苏省HIV-1复杂重组体大量出现,提示新入病毒或病毒交叉重组频繁,艾滋病的防制依然任重道远。在治疗前耐药比例大幅上升的情况下,治疗前耐药检测成为个体选择抗病毒治疗方案的关键。

    网络首发时间: 2021-04-01 09:28:51[查看摘要][在线阅读][下载 545K]
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  • 呼吸道合胞病毒IgM抗体AlphaLISA快速检测方法的建立

    陈萱;荆红波;郑玉玲;张力文;律清宇;姜永强

    呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)属于副粘液病毒科,是一种下呼吸道感染最主要的RNA病毒。RSV是引起全球婴幼儿高致死率的呼吸道感染病原,仅次于疟疾,但用于检测RSV感染的选择相对较少。本文通过抗原抗体结合原理,建立RSV IgM抗体AlphaLISA快速检测方法。小鼠抗人IgM单克隆抗体偶联的受体微球与临床血清样品中RSV特异性IgM抗体结合,RSV特异性IgM抗体再与生物素标记的RSV抗原结合,生物素连接偶联链霉亲和素的供体微球;受体微球和供体微球的距离被拉近小于200nm,680nm荧光激发供体微球生成单线态氧,扩散给受体微球,发射波长为520~620nm的荧光,荧光强度与血清中RSV特异性IgM抗体呈正比。结果显示,该方法批内变异系数与批间变异系数均小于10%,不与其他呼吸道病原体发生交叉反应,与间接免疫荧光法具有较好的一致性,总符合率达83.33%。该方法具有微量检测、快速省时、操作简便等优势,可快速检测RSV的IgM抗体,为早期确诊RSV感染提供高效可行的方案。

    网络首发时间: 2021-03-31 15:05:32[查看摘要][在线阅读][下载 1008K]
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  • 副流感病毒IgM抗体AlphaLISA快速检测方法建立

    陈萱;荆红波;郑玉玲;张力文;律清宇;姜永强

    副流感病毒(Parainfluenza virus,PIV)是较为常见且广泛的社区性获得性抗原,其感染率仅次于呼吸道合胞病毒。由于PIV感染的临床表现与其他呼吸道病毒感染无特异性差别,所以早期、快速、准确诊断尤为重要。本文建立PIV IgM抗体的AlphaLISA快速检测方法,PIV特异性抗原与待测样品中PIV IgM抗体结合使供体微珠和受体微珠相互接近时,激光激发级联反应,从而产生放大的信号。通过对PIV特异性抗原生物素标记量和稀释比例的摸索,确定最佳反应体系。该方法批内和批间变异系数均小于10%,与间接免疫荧光方法比对,总符合率高于95%,且不与其他7种常见呼吸道病原体的IgM抗体发生交叉反应。AlphaLISA方法操作简便,整个反应过程只需要25 min,可快速检测PIV的IgM抗体,为早期确诊PIV感染提供有效办法。

    网络首发时间: 2021-03-31 14:28:04[查看摘要][在线阅读][下载 528K]
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  • 右美托咪定对HIV-1包膜糖蛋白gp120诱导大鼠学习记忆障碍的改善作用及机制

    董芳娟;赵瑞丽;张煜;郝宇卉;魏增云;皇甫亮

    人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)包膜糖蛋白gp120促进P2X7受体激活与AIDS痴呆综合征的发生密切相关。右美托咪定(Dex)具有神经保护作用,在创伤性脑损伤大鼠中能够抑制P2X7受体表达并改善认知功能,但Dex在AIDS痴呆综合征中的治疗作用尚不明确。为了研究Dex对HIV-1包膜糖蛋白gp120诱导大鼠学习记忆障碍的改善作用及机制,本研究将SD大鼠分为对照组、gp120组、BzATP组、gp120+Dex组、gp120+Dex+BzATP组,进行侧脑室灌注gp120、P2X7受体激动剂BzATP组或腹腔注射Dex的操作。采用定位航行实验检测逃避潜伏期,空间探索实验检测探索时间,试剂盒检测白介素-1β(IL-1β)、白介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的含量,DHE荧光探针检测活性氧簇(ROS)的含量,western blot检测P2X7受体、NLPR3、caspase-1、p-p38MAPK的表达水平。结果显示,与对照组比较,gp120组的逃避潜伏期延长,探索时间缩短,海马中IL-1β、IL-18、TNF-α、ROS、MDA的含量及P2X7受体、NLPR3、caspase-1、pp38MAPK的表达水平增加,SOD、GPx的含量降低;与gp120组比较,gp120+Dex组的逃避潜伏期缩短,探索时间延长,海马中IL-1β、IL-18、TNF-α、ROS、MDA的含量及P2X7受体、NLPR3、caspase-1、p-p38MAPK的表达水平降低,SOD、GPx的含量增加;与gp120+Dex组比较gp120+Dex+BzATP组的逃避潜伏期延长,探索时间缩短,海马中IL-1β、IL-18、TNF-α、ROS、MDA的含量及P2X7受体、NLPR3、caspase-1、p-p38MAPK的表达水平增加,SOD、GPx的含量降低。以上结果表明,Dex对HIV-1包膜糖蛋白gp120诱导的大鼠学习记忆障碍具有改善作用,抑制P2X7受体及下游NLRP3、p-p38MAPK表达是介导这一改善作用的可能机制。

    网络首发时间: 2021-03-30 16:46:16[查看摘要][在线阅读][下载 522K]
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  • 免疫层析法检测2019新型冠状病毒抗体假阳性的原因分析和对策

    刘奕彦;叶青

    2019年12月,新型冠状病毒(SARS-CoV-2)首次被发现并很快引起全球大流行,SARS-CoV-2感染的早期诊断对疫情防控至关重要。胶体金免疫层析法检测SARS-CoV-2抗体是诊断新型冠状病毒肺炎的重要标准之一。该方法具有操作简便,报告快速,不需要仪器设备等优点。然而,该方法也存在假阳性较多的问题,给临床诊断带来了很大的困惑。本文分析和总结了在临床中采用胶体金免疫层析法检测SARS-CoV-2抗体产生假阳性的原因。结果表明最为常见的内源性干扰包括类风湿因子、嗜异性抗体、人抗动物抗体、溶菌酶、补体和交叉抗原。外源性干扰主要为标本凝固不全,标本污染和试剂盒反应体系优化不足。内源性干扰可以通过稀释、封闭和酶切等方法降低非特异性结合来减轻;消除外源性干扰需操作者严格按照实验室操作规程规范操作。此外,将兔抗μ链和/或γ链抗体F(ab')2作为固相载体的包被抗体,采用含非特异性兔IgG的Buffer,也能有效降低内源性干扰物造成的假阳性。

    网络首发时间: 2021-03-30 16:00:46[查看摘要][在线阅读][下载 508K]
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  • 基于GII.4型诺如病毒P蛋白的GII型广谱单克隆抗体制备及应用

    高珺珊;薛亮;蔡伟程;廖颖茵;左月婷;张菊梅;吴清平

    人源诺如病毒(Human noroviruses,HuNoVs)是全球引起急性胃肠炎的重要传染病原。该病毒遗传多样性丰富,包括了5个基因群以及39种基因型,免疫学检测受限。因此,本研究旨在制备广谱性的HuNoV单克隆抗体,并建立可检测多种基因型的双抗体夹心ELISA方法。本研究通过表达纯化流行毒株GII.4型HuNoVs衣壳蛋白P颗粒免疫Balb/c小鼠,筛选出3株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体并进行评价。利用辣根过氧化物酶对抗体进行标记及配对筛选,建立了HuNoVs双抗夹心ELISA检测方法,并进行验证。结果显示:B10、1D6、1C1细胞株可分泌广谱性单克隆抗体。所建立的双抗夹心ELISA方法酶标抗体最佳工作浓度为1∶5 000,捕获抗体最佳包被浓度为2.0μg/mL,该方法检测GII.4型P颗粒最低检出限为125.0ng/mL,对常见HuNoVs GII.2、GII.3、GII.4、GII.6、GII.17基因型样本均能检出,而与轮状病毒、星状病毒、肠道病毒、札幌病毒无交叉反应。批间与批内重复变异系数均小于7%。临床样本检测结果显示,本方法与荧光定量RT-PCR结果的符合率为84%。本研究成功制备了广谱性的HuNoVs衣壳蛋白单克隆抗体,建立了可应用于HuNoVs流行毒株基因型的双抗夹心ELISA检测方法,为HuNoVs的诊断及流行病学调查提供了一种简便、特异的免疫学方法。

    网络首发时间: 2021-03-30 14:53:11[查看摘要][在线阅读][下载 563K]
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  • 亲环蛋白在病毒感染中的作用

    周睿;衣岽戎;岑山

    亲环蛋白家族是一类具有肽酰-脯氨酰顺反异构酶活性的蛋白。亲环蛋白不仅具有帮助蛋白质组装和折叠、参与调节细胞内信号转导通路等多种生物学功能,还在病毒感染及病毒的复制周期中起到重要作用。本文就亲环蛋白在病毒感染过程中的具体分子机制进行综述,旨在更深入的阐明病毒的感染过程并为寻找潜在的抗病毒药物靶标提供新的理论依据及思路。

    网络首发时间: 2021-03-29 11:35:11[查看摘要][在线阅读][下载 387K]
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  • 携带高滴度猪瘟病毒C株猪睾丸细胞株的建立及蛋白质组学分析

    张智慧;魏衍全;谷玲军;张韵;孙世琪;尹双辉;郭慧琛

    猪睾丸细胞(Swine testicular,ST)广泛用于猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)的传代,为了进一步提高ST细胞增殖的CSFV滴度,我们利用有限稀释法克隆出一种稳定携带高滴度CSFV C株的单克隆细胞株(STC)。间接免疫荧光实验结果显示,几乎100%STC细胞携带CSFV抗原;且STC细胞中CSFV滴度为10~6 TCID_(50)/mL,与CSFV单次感染亲本ST细胞的病毒滴度10~4 TCID_(50)/mL相比,具有更高的病毒产量。为了探究STC细胞持续带毒后细胞内蛋白表达水平的变化,我们通过非标记定量蛋白质组学分析发现541种蛋白表达水平发生明显变化,并选取其中差异显著且与病毒复制或细胞存活相关的两种上调蛋白(GRP94,GRP78)、两种下调蛋白(β-catenin,ISG15)进行免疫印迹验证。本试验成功获得了可以稳定携带高滴度CSFV C株的STC细胞株,并初步筛选了与细胞持续带毒有关的目标蛋白,不仅为简化猪瘟传代细胞苗生产工艺提供条件,也为研究STC细胞持续携带CSFV稳定传代的机制奠定基础。

    网络首发时间: 2021-03-29 09:14:58[查看摘要][在线阅读][下载 925K]
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  • 丽水市早期新冠肺炎无症状感染者SARS-CoV-2全基因组序列分析

    王晓光;胡志勇;叶碧峰;叶灵;李羽敏;季巧英

    对1例新型冠状病毒肺炎疫情流行早期的无症状感染者临床标本进行SARS-CoV-2实验室鉴定和全基因组测定,在分子水平了解新型病毒的基因特点和变异情况,追溯病毒潜在来源。实时荧光定量PCR扩增丽水市庆元县首例确诊患者密切接触者的痰液标本SARS-CoV-2核酸,阳性RNA逆转录为cDNA构建文库后进行基于NGS的宏基因组深度测序,生物学软件分析处理数据。该密接无任何症状及体征,痰液标本SARS-CoV-2核酸阳性。测序数据包含有足够的病毒序列,组装成功后hCoV-19/Lishui/LS556/2020长29 887bp,G+C含量37.99%,在ORF1ab和N区域发现4个SNP,对应1个错义突变和3个同义突变。LS556与SARS-CoV-2参考序列核苷酸/氨基酸同源性在99.2%/97.4%以上,不同序列之间存在4~17个核苷酸差异,与蝙蝠病毒RaTG13核苷酸差异仅3.7%,存在1 141个SNP,与穿山甲病毒Guangdong/1相似性90.9%。LS556属于β冠状病毒Lineage B谱系,与LS003和ZJU-06共享完全相同的病毒,与蝙蝠/穿山甲冠状病毒进化上最相关。结合流行病学、核酸诊断、病毒溯源判定其为无症状感染者。LS556组成和结构符合SARS-CoV-2典型的基因特征,为高覆盖率序列,在流行早期与其他SARS-CoV-2基因组具有高度的同一性,突变率保持在较低水平,多数导致氨基酸位点保守置换。

    网络首发时间: 2021-03-26 14:45:40[查看摘要][在线阅读][下载 531K]
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  • 人巨细胞病毒感染通过Wnt/β-catenin通路抑制滋养细胞的增殖及侵袭

    蒋英彩;韩毓;韦佩佳;杜就旧;韦先梅;陈婵

    人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)感染能够影响胎盘绒毛外滋养细胞的增殖、侵袭,进而参与病理妊娠的发生,但具体的机制尚未阐明。在真皮成纤维细胞中的研究表明,HCMV能够抑制Wnt/β-catenin通路。因此,为了观察HCMV感染通过Wnt/β-catenin通路抑制滋养细胞增殖及侵袭的作用,本研究培养了人绒毛外滋养细胞株HTR8/SVneo。研究分为对照组、HCMV组、HCMV+LiCl组细胞。对照组细胞用培养液处理,HCMV组细胞用含有3个感染复数(Multiplicity of infection,MOI)HCMV的培养液处理,HCMV+LiCl组细胞用含有3MOI HCMV及50mmol/L Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl的培养液处理。48小时后,采用MTS法检测细胞增殖,采用Transwell检测细胞侵袭,采用western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶9(Matrix metalloproteinase 9,MMP9)、β-连环蛋白(β-catenin)和磷酸型糖原合酶激酶-3β(p-GSK-3β)的表达量。结果显示,与对照组细胞相比,HCMV组细胞的O.D_(490)水平、侵袭数目及cyclinD1、MMP2、MMP9、β-catenin、p-GSK-3β的表达量均降低(P<0.05);与HCMV组细胞比较,HCMV+LiCl组细胞的O.D_(490)水平、侵袭数目及cyclinD1、MMP2、MMP9、β-catenin、p-GSK-3β的表达量均增加(P<0.05)。以上结果表明,HCMV感染抑制人绒毛外滋养细胞的增殖和侵袭,且该作用与抑制Wnt/β-catenin通路有关。本研究阐明了HCMV感染通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活而抑制滋养细胞增殖及侵袭的分子机制,为最终阐明HCMV先天感染的致病机理积累了有价值的研究资料。

    网络首发时间: 2021-03-26 10:50:11[查看摘要][在线阅读][下载 542K]
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  • 盖塔病毒研究进展

    王玉玲;米勇;江朝源;黄瑶;谷思睿;朱玲;徐志文

    盖塔病毒(Getah virus,GETV)是披膜病毒科甲病毒属的虫媒病毒。GETV感染已在多种脊椎动物中发现,包括人类、猴子、鸟类、猪、马和其他哺乳动物。GETV感染可导致马出现发热、全身皮疹和腿水肿,仔猪关节炎和母猪生殖障碍等。目前GETV在世界范围内流行较为广泛,近年来逐步在猪群中暴发,导致部分猪场经济损失严重,同时在中国感染的宿主范围不断扩大,相继出现了第一例狐狸、猪、马、牛感染。本文对GETV的分子结构、致病机制、宿主范围、流行状况以及疫苗研究进展进行综述,以期为我国GETV的深入研究及防控工作提供一定思路。

    网络首发时间: 2021-03-23 14:28:10[查看摘要][在线阅读][下载 431K]
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  • GICA和CLIA联合检测SARS-CoV-2特异性抗体的检测策略研究

    卢小岚;汪光蓉;牟代勇;杜琴;郭晓兰;王强

    评价胶体金免疫层析法(GICA)与化学发光法(CLIA)联合检测对降低新型冠状病毒(SARS-CoV-2)特异性抗体假阳性的效果。收集2020年1月22日至2020年3月5日就诊于川北医学院附属医院及南充市中心医院的19例SARS-CoV-2确诊患者不同时段的血清33份,55例非SARS-CoV-2、其他病原体感染及自身免疫性疾病患者的血清55份,采用GICA和CLIA分别对血清SARS-CoV-2 IgM、IgG进行检测,并对结果进行分析。GCIA检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的敏感性分别为100.0%、94.74%,与CLIA(92.86%和100.0%)比较没有差异(P>0.05);GCIA检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的特异性分别为70.91%、74.55%,明显低于CLIA的特异性(98.18%和89.09%)(P<0.01);两种方法检测SARS-CoV-2 IgM、IgG结果具有一致性(P<0.001),Kappa值分别为0.434,0.406;ROC曲线分析发现,GCIA检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的AUC分别为0.855、0.846,明显低于CLIA(0.955和0.945)(P<0.05)。两种方法联合检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的敏感性分别为92.86%、94.74%,特异性分别为100.0%、100.0%;ROC曲线分析显示,联合检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的AUC分别为0.964、0.974,高于两种方法的单独检测。GICA和CLIA联合检测能有效提高SARS-CoV-2 IgM和IgG的检测特异性,值得临床推广应用。

    网络首发时间: 2021-03-19 13:11:26[查看摘要][在线阅读][下载 493K]
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  • 人肠道病毒71型基因重组的研究进展

    张海陆;宋绍霞;温红玲

    人肠道病毒71型(Enterovirus 71,HEV-A71),是手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)的常见病因,属于人肠道病毒属中的肠道病毒A型,隶属于微小RNA病毒科。许多研究证明HEV-A71经常发生基因重组并且使得HEV-A71在全球内多次暴发,这对疫苗的研发和疾病的防控是一种新的挑战。本文对HEV-A71不同亚型内、不同型间和多重重组等不同基因重组类型及其毒力、抗原性变化进行了综述。

    网络首发时间: 2021-03-19 13:10:54[查看摘要][在线阅读][下载 416K]
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  • 人乳头瘤病毒疫苗对宫颈以外部位肿瘤的保护效果研究

    黄泽宏;姚星妹;黄守杰;吴婷

    人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)感染可导致肛门-生殖器及口咽等多部位肿瘤。近年来,随着对HPV研究的深入及多种HPV疫苗陆续上市,HPV疫苗对于多部位肿瘤的保护效果受到越来越多的关注。已有大量研究证明HPV疫苗能够有效预防宫颈癌的发生,而近年也逐渐积累了一些HPV疫苗预防宫颈以外部位肿瘤的证据。本文拟综述HPV疫苗对于头颈、肛门、外阴与阴道、阴茎部位肿瘤保护效果的研究进展。

    网络首发时间: 2021-03-19 10:46:49[查看摘要][在线阅读][下载 422K]
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  • 伪狂犬病毒潜伏感染相关病毒因子研究进展

    谷思睿;赵军;陈弟诗;黄瑶;王玉玲;徐雷;周莉媛;朱玲;徐志文

    伪狂犬病毒(Pseudorabies Virus,PRV)属于α-疱疹病毒亚科,能够在猪体内建立并维持终身潜伏感染状态。潜伏感染的定期重新激活或间歇性活性循环给PRV疫病防控和净化带来巨大困难,给养猪业造成严重的经济损失。随着对α-疱疹病毒致病机制和潜伏感染机制的深入研究,近年来关于PRV潜伏感染相关转录本(Latencyassociated transcripts,LATs)研究增多,但由于病毒潜伏和激活过程涉及复杂的病毒与宿主相互作用关系,很多潜伏感染具体机制仍然不明确。因此本文重点讨论了近年来PRV潜伏感染相关病毒因子的研究进展,对PRV LAT的功能和其在潜伏感染中可能涉及的分子机制进行梳理;同时α-疱疹病毒各成员之间显著的同源性也为PRV潜伏感染和启动再激活因素的探究提供了新见解,以期为深入研究宿主抗PRV潜伏感染提供参考。

    网络首发时间: 2021-03-19 10:46:38[查看摘要][在线阅读][下载 515K]
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  • 线粒体自噬进程及其受病毒感染的影响

    聂欢欢;邱坚发;张学艳;王燕

    线粒体自噬(mitophagy)属于巨自噬的范畴,即受损线粒体被一种双层膜结构(如粗面内质网的无核糖体附着区脱落的双层膜)包裹后形成自噬小体(autophagosome),接着自噬小体的外膜与溶酶体膜融合,底物蛋白进入溶酶体,最终被各类水解酶降解的一系列过程。然而,一些病毒的细胞感染过程与线粒体自噬的发生有着密切联系。本文对线粒体自噬发生的前提条件、起始与发展的全过程以及病毒感染对线粒体自噬的影响等进行综述,以期为进一步研究线粒体自噬提供新思路。

    网络首发时间: 2021-03-19 10:46:21[查看摘要][在线阅读][下载 473K]
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  • 关于miR-223在慢性乙型肝炎患者外周血中的表达及其生物学作用的研究

    徐文超;陈聪

    观察慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)患者与健康人群外周血microRNA(miRNA)差异表达谱,寻找具有抗乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)HBV能力的miRNA。用高通量测序对CHB患者(C组)和健康对照人群(N组)各3例外周血样本进行检测,筛选差异表达的miRNA后进行qRT-PCR验证,并在细胞模型中转染miRNA mimic后,ELISA实验观察对HBsAg和HBeAg水平的影响。测序结果共1 028个基因,其中上调的基因有27个,下调的基因有20个,无明显差异的基因981个(log2FC<-0.585且P<0.05为标准),取FC改变最显著的5个miRNAs进行扩大样本量qRT-PCR验证,发现只有miR-223表达水平下降83%,与芯片结果保持一致。与未转染相比,在HepG2.2.15细胞中转染miR-223 mimic后,miR-223表达水平上升5.81倍,而HBsAg和HBeAg分泌分别下降了42%和34%,P<0.05;而转染阴性对照的miR-223表达水平及HBsAg和HBeAg分泌无明显改变,P>0.05。结论 miR-223在CHB患者外周血中的表达显著下降,基于miR-223高表达的新型药物有可能对HBV有较好的抗病毒作用。

    网络首发时间: 2021-03-19 10:46:05[查看摘要][在线阅读][下载 505K]
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  • 高级别生物安全实验室降低高致病性病毒实验生物安全防护水平的科研策略

    赵焱

    高级别生物安全实验室的主要任务是探索高致病性病毒的致病、免疫机制,开发疫苗、药物和诊断试剂,保障人类和动物的健康。在高级别生物安全实验室内,高致病性病毒实验活动的经济成本和时间成本都是高昂的。为了安全、高效、低成本地开展科学研究,高级别生物安全实验室可采取降低高致病性病毒实验活动生物安全水平(例如生物安全四级降至二级)的科研策略,这些策略包括本科属的低致病性病毒、缺陷型病毒、病毒样颗粒、假病毒、重新编译遗传密码子和计算机辅助药物设计。

    网络首发时间: 2021-03-18 11:41:54[查看摘要][在线阅读][下载 349K]
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  • 一种简单有效的基于阳离子交换层析的重组腺相关病毒纯化方法

    周豪杰;王晨旭;马强;李媛;高传玉;张守涛

    本研究旨在探索出一套简单有效的重组腺相关病毒(rAAV)纯化方法,为基因治疗提供有力载体,推进rAAV的基因治疗走进临床。我们选用国际通用的无辅助病毒包装体系,将pAAV-cTnT-eGFP,pAAV-R_2C_9和pHelper三种质粒共转染HEK 293T细胞系进行病毒包装,并通过荧光显微镜观察包装效率;应用阳离子交换层析法对收获处理后的病毒液进行纯化,包括第Ⅰ轮高pH下的除杂纯化和第Ⅱ轮以严格密集梯度洗脱为特点的进一步纯化。通过SDS-PAGE和Western Blot(WB)对纯化产物进行检测,使用Q-PCR法测定病毒滴度,最后再通过透射电镜对病毒颗粒进一步验证和分析。荧光显微镜结果显示,病毒包装效率较高,可达70%~80%;SDS-PAGE结果表明病毒纯化效果显著,第Ⅰ轮纯化除去了大量的蛋白杂质,第Ⅱ轮纯化也明显除去部分杂质;WB和电镜结果证明,纯化产物实为rAAV病毒,经Q-PCR测得病毒的滴度可达2.15×10~(12)GC/mL,而且电镜进一步观察到我们纯化的终成品病毒中空颗粒含量极少,包含基因的实心颗粒占比可达99%。本研究成功开发出了一套的简单方便、切实有效的rAAV纯化方法,并且该方法能有效去除空壳病毒,提高包含基因的实心病毒占比。

    网络首发时间: 2021-03-16 15:24:48[查看摘要][在线阅读][下载 650K]
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  • 宫颈人乳头瘤病毒感染治疗方法研究进展

    徐帅师;聂文佳;张咏梅

    人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)感染所致宫颈疾病是常见的性传播疾病之一,也是导致宫颈癌发生的重要危险因素。目前尚无特异有效的临床治疗手段,针对HPV感染所致宫颈疾病治疗策略的研究和应用是世界范围内迫切需要解决的重要问题。本文针对宫颈HPV感染治疗策略从手术治疗、物理治疗、药物治疗(包括西药和中药)和免疫治疗四方面的研究进展进行综述。

    网络首发时间: 2021-03-12 16:47:50[查看摘要][在线阅读][下载 517K]
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  • 通过反向遗传操作技术构建传染性支气管炎病毒nsp15核酸内切酶活性缺陷型重组毒株

    翁文莲;宫晓倩;高波;方守国;王欢;钱琨;丁铲;廖瑛

    冠状病毒编码保守的核酸内切酶nsp15(Non-structural protein 15),参与拮抗干扰素反应。传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)属于γ属冠状病毒,其nsp15的功能尚未得到解析。为探讨nsp15在IBV感染和复制过程中的作用,本研究对nsp15的核酸内切酶活性中心H238进行突变,通过体外连接技术构建重组病毒rIBV-nsp15-H238A,并对病毒滴度、感染复制能力和生长曲线进行鉴定。方法如下:将IBV Beaudette-R毒株的基因组分成5个片段克隆到质粒载体,并在每个片段加上BsaI或BsmBI限制性酶切位点。通过质粒载体进行扩增后,通过酶切获得cDNA片段,在体外连接成全长基因组cDNA,转录出全长基因组RNA,跟N的转录本一起电击转染到Vero细胞,拯救出重组病毒rIBV和rIBV-nsp15-H238A。利用空斑试验检测比较rIBV和rIBV-nsp15-H238A的病毒滴度和空斑大小,鉴定nsp15核酸内切酶活性对IBV感染性的影响。结果显示,rIBV-nsp15-H238A的病毒滴度为2.7×10~6PFU/mL,比rIBV的病毒滴度(9.4×10~6PFU/mL)低3倍有余,且rIBV-nsp15-H238A空斑孔径远小于rIBV,说明rIBV-nsp15-H238A复制和扩散能力远低于rIBV。利用TCID_(50)检测病毒的生长曲线,结果表明在感染后0~24h,rIBV-nsp15-H238A的生长曲线均低于rIBV。由此可见,IBV nsp15H238核酸内切酶活性位点对IBV的感染复制起着重要作用。本研究通过反向遗传操作构建nsp15核酸内切酶活性缺陷型重组病毒,为研究nsp15的功能提供了一个有力的工具。

    网络首发时间: 2021-03-11 17:29:08[查看摘要][在线阅读][下载 648K]
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  • 三七总黄酮通过miR-223-3p/FOXO1分子轴缓解病毒性心肌炎炎症反应和细胞损伤

    许德星;万发银;张静怡;戴若竹

    病毒性心肌炎严重影响患者身体健康,中药材中黄酮类物质被证实对病毒性心肌炎有治疗作用,但其中三七总黄酮对柯萨奇B3病毒导致的心肌炎发挥治疗作用的分子机制尚不明确。以探讨三七总黄酮缓解病毒性心肌炎炎症反应及细胞损伤的作用机制。采用RT-qPCR检测心肌细胞中miR-223-3p的表达水平;Western blotting检测心肌细胞中转录因子叉头框蛋白O1(Forkhead box O1,FOXO1)蛋白表达水平;MTT实验检测心肌细胞存活率;流式细胞术检测心肌细胞凋亡率;ELISA检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)、心肌酶谱磷酸肌酸激酶(Creative kinase,CK)和乳酸脱氢酶(Lactic dehydrogenase,LDH)、心肌损伤标志物心肌肌钙蛋白T(Cardiac troponin T,cTnT)和B型尿钠肽(Brain natriuretic peptide,BNP)的水平;双荧光素酶报告基因检验miR-223-3p和FOXO1之间的靶向关系。实验结果显示,三七总黄酮能够缓解病毒性心肌炎模型细胞的炎症反应及细胞损伤,并显著上调模型细胞中miR-223-3p的水平。敲除模型细胞中的miR-223-3p能够逆转三七总黄酮对病毒性心肌炎的治疗作用。通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-223-3p靶向负调控FOXO1蛋白的表达。进一步研究发现,过表达FOXO1可抑制三七总黄酮对病毒性心肌炎的治疗作用;但同时过表达miR-223-3p后,过表达FOXO1对三七总黄酮疗效的抑制作用被逆转。由此得出结论,三七总黄酮可缓解病毒性心肌炎模型细胞的炎症反应及细胞损伤,其作用机制是通过调控miR-223-3p/FOXO1分子轴实现的。

    网络首发时间: 2021-03-10 13:15:19[查看摘要][在线阅读][下载 631K]
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  • 禽流感病毒神经氨酸酶蛋白的研究进展

    李梦娇;刘伟;丁铲;孟春春

    禽流感病毒在世界范围内广泛流行,给养禽业造成了巨大的经济损失,有效的疫苗接种策略可以帮助预防和控制该疾病。抗原转换和漂移是流感病毒发生变异的两种主要机制。NA蛋白是流感病毒的表面纤突之一属于Ⅱ型糖蛋白,在病毒成熟时发挥神经氨酸酶的作用进而有利于病毒的成熟和释放,并在调控受体结合、病毒出芽等方面发挥着重要的作用。抑制NA蛋白活性具有预防和治疗疾病作用的事实证实NA蛋白是一个抗病毒的有效靶点。此外基于NA蛋白设计流感疫苗,具有免疫保护期更持久和保护范围更广的优势。

    网络首发时间: 2021-03-10 07:23:53[查看摘要][在线阅读][下载 413K]
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  • 基于PI3K/PKB通路研究EGCG对CVB3感染致病毒性心肌炎小鼠细胞凋亡的影响

    张思思;谢达奇;胡文奕;邓媛

    细胞凋亡是造成病毒性心肌炎(VMC)发病过程中心肌损伤的重要因素;表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对缺血再灌注引起的细胞凋亡具有抑制作用,但是否抑制VMC发病过程中的心肌细胞凋亡尚不明确。因此,本研究将分析EGCG对VMC小鼠细胞凋亡的影响及分子机制。BALB/c小鼠随机分为对照组、VMC组(腹腔注射CVB3悬液造模)、VMC+EGCG组(腹腔注射CVB3悬液造模后腹腔注射EGCG)、VMC+EGCG+LY组(腹腔注射CVB3悬液造模后腹腔注射EGCG及PI3K抑制剂LY294002)。检测血清心肌损伤标志物肌钙蛋白I(cTnI)及乳酸脱氢酶(LDH),心肌中CVB3滴度及RNA表达、HE染色、凋亡基因及p-PI3K、p-PKB表达。结果显示,与对照组比较,VMC组血清cTnI、LDH含量、心肌中CVB3滴度及RNA表达、细胞凋亡率、cleaved caspase-3表达升高,心肌中Survivin、p-PI3K、p-PKB表达降低(P<0.05);与VMC组比较,VMC+EGCG组血清cTnI、LDH含量及心肌中细胞凋亡率、cleaved caspase-3表达降低,心肌中Survivin、p-PI3K、p-PKB表达升高(P<0.05),心肌中CVB3滴度及RNA表达无明显变化(P>0.05);与VMC+EGCG组比较,VMC+EGCG+LY组血清cTnI、LDH含量、心肌中细胞凋亡率、cleaved caspase-3表达升高,心肌中Survivin、p-PI3K、p-PKB表达降低(P<0.05),心肌中CVB3滴度及RNA表达无明显变化(P>0.05)。以上结果表明EGCG对VMC小鼠心肌细胞凋亡具有抑制作用且该作用与激活PI3K/PKB通路有关。

    网络首发时间: 2021-03-04 18:55:40[查看摘要][在线阅读][下载 778K]
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  • TLR4信号通路介导病毒性急性肺损伤与ARDS的研究进展

    张雨茜;王荣花;陈祥;严彦;张评浒

    Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)是参与非特异性免疫的Ⅰ型跨膜蛋白分子,可识别病原相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns,PAMP)并在病原体侵入体内的早期阶段激活机体的免疫应答,在响应宿主细胞对微生物病原体的识别中起重要作用,是机体抵抗感染疾病的重要屏障。以流感病毒和冠状病毒为代表的呼吸道病毒感染在临床具有极高的发病率和死亡率。此类病毒感染细胞后可通过模式识别受体和病原体相关分子模式相互作用激活宿主的先天免疫系统,诱发宿主产生过激的炎症反应从而引发“细胞因子风暴”,最终导致急性肺损伤与急性呼吸窘迫综合症而致人死亡。因此,本文就Toll样受体家族中的Toll样受体4介导的信号通路为对象,就其介导的信号通路在流感病毒与冠状病毒复制及其在导致病毒性急性肺损伤与ARDS形成中的作用及靶向抑制该通路治疗病毒性肺炎的研究进展作一综述,以供同行参考。

    网络首发时间: 2021-03-03 15:07:46[查看摘要][在线阅读][下载 1129K]
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  • 麻疹疫苗研究新进展

    李焱;张勇;许松涛

    麻疹是由麻疹病毒引起的传染性很强的急性发热出疹性疾病,好发于5岁以下的儿童,近年来成年人发病有所增加。随着全球麻疹发病率升高,我国二胎政策放开,麻疹的预防更显重要,而疫苗免疫是麻疹控制和消除最重要的策略。本文就麻疹的流行病学、现行麻疹疫苗和在研疫苗的安全性、有效性和稳定性及疫苗应用面临的问题进行综述,为我国新型麻疹疫苗研发和麻疹预防提供基础性资料。

    网络首发时间: 2021-03-01 10:32:19[查看摘要][在线阅读][下载 577K]
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  • 猪流行性腹泻病毒单克隆抗体及其抗原表位的研究进展

    张志榜;彭维祺

    猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(PED virus,PEDV)引起的一种严重危害养猪生产的常见疫病。近年来,由于新的PEDV变异毒株的出现,许多国家的养猪业遭受了巨大的经济损失。PEDV也因此受到更多关注,关于PEDV的研究报道也日渐增多。基于国内外有关PEDV的最新研究进展,本文系统归纳和分析了PEDV结构蛋白和非结构蛋白单克隆抗体以及单克隆抗体识别的特异性抗原表位,以期为开发鉴别诊断方法和表位疫苗等提供信息。

    网络首发时间: 2021-03-01 09:09:00[查看摘要][在线阅读][下载 517K]
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  • 肠道病毒71型致神经元病变的机制研究进展

    陈天扬;刘正芸;王欢

    中枢神经系统感染是由病原体侵犯中枢神经系统引起的一类具有较高的发病率和死亡率的疾病。病毒是引起中枢神经系统感染的重要病原体之一,其中肠道病毒71型在继发神经系统症状的重症手足口病患儿中较为常见。EV71致神经元病变是其感染中枢神经系统的基础,阐明肠道病毒71型致神经元病变的机制,不仅可以促进基础病毒学研究,也能为抗病毒药物的开发提供思路,对临床肠道病毒71型致中枢神经系统感染的治疗提供支持。本文主要从肠道病毒71型侵入神经元的受体途径、损伤神经元的线粒体途径、诱导凋亡与自噬、感染胶质细胞后对神经元的旁观者效应、免疫病理机制以及病毒自身因素等多个方面,对肠道病毒71型致神经元病变机制展开综述。

    网络首发时间: 2021-02-26 09:16:54[查看摘要][在线阅读][下载 962K]
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  • 猪塞内卡病毒病原学研究进展

    陶倩;曹飞;彭珂楠;朱玲;徐志文

    2014年以来,巴西、美国、中国、泰国等多个国家相继暴发了塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)疫情,且流行范围呈扩大趋势,SVA逐渐成为研究和关注的热点。本文主要从SVA病毒蛋白结构功能、入侵机制、适应性免疫反应及免疫逃逸等方面对SVA相关病原学研究进行综述,以期为进一步开展猪SVA的致病机制研究以及疫苗研发提供帮助。

    网络首发时间: 2021-02-25 14:46:28[查看摘要][在线阅读][下载 547K]
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  • 抗GII.3型诺如病毒阻断型单克隆抗体的制备和鉴定

    霍玉奇;郑礼钧;刘金瑾

    诺如病毒(norovirus,NoV)是引起非细菌性急性肠胃炎的主要病原体之一。目前国内外还没有关于抗GII.3NoV组织血型抗原(histo-blood group antigens,HBGAs)阻断型单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)的报道,本研究制备了抗GII.3型NoV HBGA阻断型mAbs,并对这些抗体特性进行了初步的鉴定。采用纯化的GII.3型(GenBank登录号:KY767665)NoV病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)免疫BALB/c小鼠。将GII.3,GII.4(GenBank登录号,KF306214),GII.3S/GII.6P,GII.6S/GII.3P,GII.4-VP1/GII.3-P2主要衣壳蛋白(VP1)抗原或嵌合抗原作为包被抗原采用间接ELISA方法分别对细胞克隆株进行筛选,采用体外HBGA-VLP结合阻断实验对筛选的mAbs进行阻断活性鉴定,利用基于涵盖GII.3突环区(protruding domain,P区)的重叠多肽ELISA和western blot(WB)对阻断抗体结合位点进行特性分析。体外HBGA-VLPs阻断实验显示三株细胞分泌抗体具有阻断活性。挑选目标株制备腹水并对mAbs进行纯化。WB结果显示三株HBGA阻断型mAbs只识别非变性的GII.3 VP1蛋白;基于GII.3 P区重叠多肽的间接ELISA结果显示三株HBGA阻断型mAbs与被检测多肽无结合活性。本研究制备了具有HBGAs阻断活性的GII.3 NoV特异性mAbs,全部只识别非变性的GII.3 VP1蛋白,且结合位点位于GII.3 VP1 P2区。抗GII.3 NoV HBGAs阻断型mAbs的获得为后续研究GII.3 NoV的进化、感染机制和HBGAs结合位点提供了原材料。

    网络首发时间: 2021-02-24 13:56:42[查看摘要][在线阅读][下载 485K]
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  • 鸭甲型肝炎病毒VP1研究进展

    王莹;张兴晓;朱洪伟

    甲型鸭肝炎病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV)是造成雏鸭死亡率高的主要原因之一,给养鸭业带来了巨大的经济损失。而其主要衣壳蛋白VP1由于具有多种优势抗原表位,能够刺激机体产生中和抗体,被广泛认为是DHAV遗传变异的重要依据。本文主要介绍了VP1常见的突变位点及其对病毒特性的影响、VP1的改造和VP1的遗传演化,为进一步了解DHAV的遗传进化,疫苗开发与选择提供参考。

    网络首发时间: 2021-02-24 11:25:21[查看摘要][在线阅读][下载 436K]
    [被引频次:0 ][下载次数:21 ]
  • 2018-2019年福州腹泻住院儿童A组轮状病毒全基因组分析

    黄枝妙;吴冰珊;林琦;林卫东;翁育伟

    了解2018-2019年福州市五岁以下腹泻住院儿童标本中A组轮状病毒(RVA)基因组特征。通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对49份RVA阳性标本进行核酸扩增,对扩增到的40份标本进行全基因组二代测序,获得G1P[8]型RVA毒株7株,G9P[8]型RVA毒株33株。根据VP7节段分型,40株RVA毒株中有30株G9-Ⅵ亚型、3株G9-Ⅲ亚型和7株G1-Ⅰ亚型;根据VP4节段分型,40株RVA毒株均属于P[8]-3亚型。全基因组核苷酸序列分析表明,除了VP7节段外,序列差异比较大的有NSP4和NSP1两个节段。本研究获得11株G9P[8]型Wa-like株(G9-P[8]-I1-R1-C1-M1-A1-N1-T1-E1-H1),22株NSP4节段重配的G9P[8]-E2株(G9-P[8]-I1-R1-C1-M1-A1-N1-T1-E2-H1),在测序的33株G9P[8]型RVA毒株中G9P[8]-E2重配株占66.7%。7株G1P[8]型RVA毒株均为Wa-like株。研究结果表明,2018-2019年福州地区流行的RVA毒株中G9P[8]-E2重配株已经成为优势株,为了更全面了解福州地区RVA毒株的遗传变异情况,后续还需加大标本量持续进行监测。

    网络首发时间: 2021-02-24 10:43:35[查看摘要][在线阅读][下载 594K]
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  • 猪δ冠状病毒主要蛋白功能研究进展

    黄瑶;曹飞;李凤琴;谷思睿;王玉玲;岳健国;徐志文;周远成;朱玲

    猪δ冠状病毒(Porcine Deltacoronavirus,PDCoV)是冠状病毒科,δ冠状病毒属成员,为单股正链RNA病毒。由于猪δ冠状病毒是一种新型肠道冠状病毒(于2012年首次报道),目前对其研究较少,缺少商品化的疫苗。对疫病的防控无疫苗可用,一旦发病,会对猪场造成严重损失。本文综述了已有的关于猪δ冠状病毒结构蛋白、辅助蛋白、非结构蛋白等的特点和功能,以期为深入研究PDCoV致病机制和免疫机理提供参考,从而有助于其疫苗研发。

    网络首发时间: 2021-02-23 17:22:45[查看摘要][在线阅读][下载 489K]
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  • 表达荧光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因重组非洲猪瘟病毒的构建

    康力;周仕君;宋洁;李江南;翁长江

    非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染家猪和野猪引起的一种高致病性传染病,家猪感染ASFV强毒株后死亡率接近100%。为了研究ASFV的致病机制,利用绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告基因构建重组病毒已经广泛应用,但易于定量检测且适用于高通量筛选的重组ASFV目前没有报道。本研究以ASFV HLJ/18分离株为亲本病毒,采用CRISPR/Cas9基因编辑技术和同源重组技术将表达Gaussia荧光素酶(Gluc)和EGFP的报告基因表达盒插入到ASFV的K145R基因的位置,构建可以同时表达Gluc和EGFP的重组ASFV(rASFV-Gluc-EGFP)。通过PCR鉴定、Gluc和EGFP表达的检测,确定获得的重组ASFV能够感染猪肺泡巨噬细胞且表达Gluc和EGFP。对构建的重组病毒和亲本病毒进行生长曲线比较,结果表明插入的报告基因不影响病毒在猪肺泡巨噬细胞中的复制。F5、F10和F15代重组病毒基因鉴定和报告基因表达检测结果表明,重组病毒能稳定表达插入的双报告基因。本研究成功构建了表达Gluc和EGFP的重组ASFV,可以针对报告基因进行定量检测和高通量筛选,为ASFV的感染和致病机制研究奠定坚实的基础。

    网络首发时间: 2021-02-23 16:31:25[查看摘要][在线阅读][下载 560K]
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  • 寨卡病毒检测研究进展

    那琳;许梅花

    寨卡病毒病是近年来在非洲、亚洲、南美洲等地流行的一种隐性传染病。该病由寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)感染导致,虽然患者或携带者的病情并不明显,或在短期内很难察觉。但由于近些年来的突然流行,患者数目的急剧增加,而且各国间贸易往来愈加繁荣,亦加快了该疾病流行的步伐。疾病的防治离不开确切的诊断,如何快速、准确检测出寨卡病毒不容小觑,是急需解决的世界性难题之一。

    网络首发时间: 2021-02-05 08:38:44[查看摘要][在线阅读][下载 407K]
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  • 引起一起暴发性急性胃肠炎疫情的埃可病毒型基因特征分析

    周健明;谢显清;方苓;金玉娟;曾汉日;李静媚;刘凤仁;李彩霞;李晖;刘渠;张勇;郑焕英

    埃可病毒18型(Echovirus 18,E18)属于B组肠道病毒(Enterovirus B,EV-B),是引起病毒性脑膜炎的重要病原体。对2019年4月广东省深圳市龙岗区一起急性胃肠炎疫情进行病原学鉴定及病原基因特征分析。此次疫情共有26名患者,均以发热、呕吐、腹泻、腹痛为主要症状。从其中18名病例采集了18份肛拭子标本,采用实时荧光RT-PCR、病毒分离(RD细胞)和半巢式聚合酶链反应法以鉴定病原,扩增病毒全长VP1区,测序并进行系统进化分析。结果显示,18份标本中11份肠道病毒核酸阳性,其中8份为E18。病毒分离得到2株病毒,从肛拭子标本直接扩增得到的7条E18全长VP1核苷酸序列,核苷酸相似性为100%,与GenBank中E18参考株的核苷酸及氨基酸同源性分别为79.2%~96.4%和93.3%~99.3%;进化树显示,深圳龙岗E18分离株(GDSZ1902)归属由中国分离株组成的C2a进化分支,在其VP1蛋白中的底部环处发现一处特异的氨基酸变异(D200N)。从流行病学和病原学结果分析,E18是引起本次深圳市龙岗区急性胃肠炎疫情的主要病原,属于中国E18主要流行株的进化分支,这是我国首次发现E18引起急性胃肠炎疫情的报道。

    网络首发时间: 2021-01-04 15:53:20[查看摘要][在线阅读][下载 822K]
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  • hDPP4转基因及定点敲入小鼠模型的建立及其对易感性比较

    熊芮;李倩倩;彭泽旭;黄维金;刘甦苏;王辰飞;柳全明;范昌发

    中东呼吸系统综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)是2012年发现的新型高致病性冠状病毒,其病死率高达34.4%。人二肽基肽酶-4(human dipeptidyl peptidase-4,hDPP4)分子是MERS-CoV进入宿主细胞的受体。为了获得稳定的MERS-CoV易感小鼠模型,本文分别利用Tol2转基因技术和CRISPR/Cas9技术将hDPP4受体导入C57BL/6小鼠,筛选获得转基因小鼠hDPP4-Tg、定点敲入小鼠hDPP4-KI;通过Q-PCR、Western Blot及活体成像技术,分析了hDPP4基因的表达特征。结果显示,在hDPP4-Tg小鼠中,其表达水平较低,在脑中高表达;而在hDPP4-KI中整体表达水平高,表达优势脏器为肺。假病毒感染实验表明,hDPP4-Tg几乎不易感,而hDPP4-KI小鼠对假病毒高度易感。进而,对假病毒感染hDPP4-KI小鼠的感染途径、感染剂量、是否剃除被毛等条件进行优化,获得了稳定易感的MERS-CoV假病毒感染模型,并利用该模型初步评价了单克隆抗体hMS-1的体内活性。本研究显示,即使相同的受体基因,不同策略构建的遗传修饰小鼠模型的效果差异较大;受体分子表达水平与模型的易感性高度相关;本研究获得的高效而稳定的MERS-CoV假病毒感染模型可望在抗体评价、疫苗研制、药物筛选等领域提供模型工具,提示将受体分子定点插入小鼠基因组、高表达受体基因是成功构建病毒易感模型首选策略。

    网络首发时间: 2020-06-19 16:09:23[查看摘要][在线阅读][下载 676K]
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  • EB病毒的发现:偶然之中的必然

    夏巍;赖永静;杜龙;王梦琳;王红;戢克铜;冯清源;唐安洲

    肿瘤作为威胁人类健康的第一大杀手,自发现伊始全球科研工作者对于其病因的求索就从未停止过。1958年英国外科医师Denis Parsons Burkitt在乌干达医院观察到一种独特类型的肿瘤,1964年Michael Anthony Epstein和Yvonne Barr利用电子显微镜在这种特殊肿瘤的活检组织细胞中观察到一种类似疱疹病毒颗粒的新病毒,并将其命名为EB病毒,这无疑为肿瘤的病因研究开启了一扇新的大门—病毒与肿瘤。EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)的发现是医学史上一项革命性的发现,如同许多其它伟大发现一样,EB病毒的发现之旅充满了曲折艰辛,亦不乏机缘巧合,例如Denis Parsons Burkitt与Michael Anthony Epstein具有决定性作用的会面,一个是外科医师,一个是动物病毒学家;一个在贫穷落后的非洲乌干达,一个在正值百花齐放、百家争鸣的英国伦敦,似乎是命运的安排才让两个看似毫不相干的人得以相见。这样的“偶然”还有很多。然而,当我们详尽的了解这趟不同寻常的旅程之后发现每一个巧合或是偶然背后都有着必然,这种必然来源于他们对真理的坚持,对细节的专注,以及敢于推陈出新的创新精神。探寻EB病毒的发现过程,不仅可以更加全面的了解EB病毒,丰富科研知识,更重要的是对前辈们优秀品质的继承和发扬。

    网络首发时间: 2019-03-15 10:50:34[查看摘要][在线阅读][下载 442K]
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  • 五株人冠状病毒NL63的基因型鉴定及S1 domain基因特征分析

    何佩;崔爱利;徐瑾;高立冬;余鹏博;孙凯旋;许文波;许晓光

    为阐明我国部分地区人冠状病毒(Human coronavirus,HCoV)NL63基因特征,本研究对2013年陕西省、2018年河南省和湖南省送检的5株HCoV-NL63核酸检测阳性的呼吸道样本进行HCoV-NL63基因型别鉴定及S1 domain基因特征分析。通过对HCoV-NL63棘突蛋白(Spike glycoprotein,S)基因的S1 domain区域进行基因扩增和序列测定,同时结合GenBank数据库下载的1983~2018年其他国家74条HCoV-NL63代表株序列和2007~2010年中国流行的12条HCoV-NL63代表株序列,构建基因亲缘性关系树,并对S蛋白的S1 domain区域进行核苷酸序列比对分析。结果提示全球HCoV-NL63流行株可划分为A和B两个基因型;A基因型可进一步划分为A0,A1,A2和A3四个基因亚型,其中本研究将GenBank中2008年中国流行的2株HCoV-NL63毒株划分为新基因亚型(A3);B基因型可进一步划分为B0,B1和B2三个基因亚型。A和B基因型的HCoV-NL63代表株序列在地域分布上无明显差异,但A基因型不同基因亚型的HCoV-NL63序列在年代分布上呈现出一定的时间进化趋势。在我国A和B基因型HCoV-NL63均已被检测到,但主要以A基因型流行为主,且主要集中在A1和A2基因亚型。不同基因型HCoV-NL63序列在S1 domain区域核苷酸和氨基酸序列上存在特征性差异。本研究通过对五株HCoV-NL63基因型鉴定及S1 domain基因特征分析,初步阐明了我国部分地区流行的HCoV-NL63基因型/基因亚型分布情况及基因特征,丰富了我国本土流行的HCoV-NL63基因数据库,为我国HCoV-NL63分子流行病学研究及分子检测和监测技术的改进和验证提供了基础基因数据。

    网络首发时间: 2019-03-08 15:54:24[查看摘要][在线阅读][下载 563K]
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